Neurogenesin-1基因促進大鼠脊髓損傷后功能修復的實驗研究.pdf

1、目的：研究大鼠Neurogenesin-1（Ng1）基因對成體脊髓損傷后神經生發(fā)及功能恢復的作用，并初步探討其可能機制，從而為脊髓損傷修復提供一種新的實驗研究方法。
　　 方法：將36只大鼠隨機分為實驗組和對照組，每組18只：實驗組(Groupl，n=18)，對照組(Group2，n=18)。利用改良Allen法制備大鼠T10脊髓損傷模型后，通過Alzet微泵分別向實驗組和對照組持續(xù)轉染入Ng1重組質粒和空白質粒。術后24h、1

2、周、2周、3周和4周進行BBB評分系統監(jiān)測大鼠運動功能恢復情況。分別在脊髓損傷后2周和4周處死等量動物(n=6)，取材行HE染色，光鏡下比較兩組間脊髓組織形態(tài)學變化；另將損傷節(jié)段脊髓先固定于戊二醛中，透視電鏡下觀察兩組間脊髓損傷后超微結構的變化。同樣在損傷后2周和4周兩組分別處死等量動物(n=6)，行免疫熒光組織化學方法，觀察內源性神經干細胞的存活、增殖、分化等情況。BrdU標記增殖的神經干細胞；MAP-2標記神經元；GFAP標記星形膠

3、質細胞；每張切片隨機選取5個單位視野分別計數染色陽性細胞數目，取平均值獲得結果。
　　 結果：⑴術后1周、2周、3周、4周實驗組BBB評分明顯高于對照組(P<0.05)；其中術后4周實驗組BBB評分為（16.80±1.79）分，功能恢復情況明顯優(yōu)于對照組（9.60±1.67）分，差異有統計學意義(P<0.01)。⑵脊髓損傷后14天，實驗組HE染色組織學形態(tài)稍好于對照組。到脊髓損傷后28天，實驗組組織形態(tài)學基本接近正常脊髓組織。電

4、鏡觀察顯示在損傷后28天,實驗組超微結構明顯好轉，只可見少量軸索變性，軸漿內線粒體腫脹情形明顯減輕，絕大部分可見嵴突。⑶免疫組織化學結果：在脊髓損傷后14天及28天，損傷治療組MAP-2+/BrdU+雙陽性標記的新分化神經元細胞數和BrdU+/GFAP+雙陽性標記的新分化膠質細胞數與對照組有顯著性差異(P<0.05)。這表明應用Ng1基因治療后的實驗組分化為神經元的內源性神經干細胞數量比對照組明顯增多，同時分化為星型膠質細胞的細胞數量減

5、少。同時,實驗組Nestin+/BrdU+雙陽性標記的新生內源性神經干細胞數明顯高于對照組(P<0.05),表明實驗組中新生的內源性神經干細胞數量明顯多于對照組。
　　 結論：①脊髓損傷區(qū)域通過Alzet微泵持續(xù)轉染入Ng1基因可以給脊髓損傷提供神經生發(fā)的環(huán)境，能夠促進內源性神經干細胞增殖及分化為神經元，同時抑制內源性神經干細胞分化為星形膠質細胞。②BBB評分顯示傷后28天實驗組評分明顯高于對照組，說明脊髓損傷區(qū)域施加Ng1基因