葛根素對H-,2-O-,2-誘導成骨細胞損傷的干預研究.pdf

1、目的：觀察葛根素(Puerarin，Pue)和過氧化氫（H2O2)在體外對大鼠成骨細胞(osteoblast，OB)增殖、分化和礦化功能的影響，探討Pue對H2O2誘導OB氧化損傷的保護作用。 方法：①多次酶消化法分離新生大鼠顱蓋骨OB，觀察細胞的形態(tài)、生物學特點及成骨特性，以堿性磷酸酶(ALP)化學染色、骨鈣素(OCN)免疫組化染色等鑒定OB，采用第二代OB進行實驗。②隨機將細胞分為正常對照組、Pue(10-10～10-3mo

2、l/L，“P”)組和H2O2(10-9～10-3mol/L,“H”)組，應用MTT比色法分別觀察第1～4d細胞的增殖，醌衍生物比色法檢測誘導分化第2～8dALP的活性，茜素紅染色法觀察誘導分化第14d Pue組的礦化結節(jié)形成并計數(shù)。③用“P”預孵育OB 48h，加入0.1mmol/L H2O2(H')繼續(xù)孵育24h[P+H’]；H’預孵育OB 24h，換“P”孵育48h[H’+P]，測定細胞的增殖與ALP活性。④先以10-5mol/LP

3、ue(P’)孵育OB 48h，再加入H’24h[P’+H’]后測定細胞內(nèi)的微量丙二醛(mMDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和總抗氧化能力(T-AOC)。 結果①與正常對照組相比，“P”組中10-8～10-5mol/L的MTT值(P<0.01)、ALP活性(P<0.01)和礦化結節(jié)的形成(P<0.05)均增加，且組間兩兩比較以10-6mol/L組增加更明顯(P<0.01)。 MTT值在第1～4d均升高，其中第3d升高最為明

4、顯(P<0.01)，ALP活性的增加主要出現(xiàn)在誘導分化第2d和第4d(P<0.01)；Pue10-4mol/L組在第2d MTT值升高，誘導分化第4d ALP活性增加(P<0.01)，第14d礦化結節(jié)數(shù)無差異(P>0.05)；Pue10-3mol/L組僅在第1d MTT值減少(P<0.05)，第2d和4dALP活性降低(P<0.01)，第14d礦化結節(jié)形成減少(P<0.05)。②H2O2在低濃度(1×10-8～6×10-5mol/L)時

5、，MTr值(P<0.05)、ALP活性(P<0.001)較正常對照組明顯升高；在高濃度(1×10-4～1×10-3mol/L)時MTI值、ALP活性明顯降低(P<0.001)，以0.1mmol/L最顯著(P<0.001).在觀察期間H2O2對OB MTT值和ALP活性均有影響，分別在孵育第3d和誘導分化第6d影響最顯著(P<0.001).③與H'組比較，“P+H”和“H'+P”組中10-7～10-4mol/LPue使受損OB的MTT值升

6、高(P<0.01)；10-8～10-4mol/L使ALP活性增加(P<0.001)，都以10-5mol/L影響更為顯著(P<0.001)，且損傷前加入Pue能起到更好的保護作用(P<0.001)。④與正常對照組相比，H’組的mMDA含量顯著增加而SOD活性和T-AOC顯著降低(P<0.01)；Pue使受損OB的mMDA含量顯著減少(P<0.01)，而SOD活性(P<0.01)和T-AOC(P<0.05)則顯著增強，但仍不能使mMDA含量