CD147通過影響ABCG2的表達和功能介導(dǎo)乳腺癌的化療耐藥.pdf

1、背景:
　　CD147，一種屬于免疫球蛋白超家族成員的跨膜糖蛋白，近年來被證實在耐藥的乳腺腫瘤細胞中增高表達，通過對耐藥相關(guān)蛋白（如CD44，MCTs，ATP家族成員）的調(diào)控而參與介導(dǎo)腫瘤多藥耐藥(MDR)。ABCG2，又名BCRP，是目前為眾人所知的乳腺癌耐藥相關(guān)蛋白，最先從乳腺癌耐藥細胞株MCF-7/AdrVp克隆出來，通過介導(dǎo)多種化療藥物細胞外流導(dǎo)致腫瘤細胞對藥物產(chǎn)生抵抗。目前有文獻發(fā)現(xiàn)CD147、ABCG2在白血病細胞膜上

2、形成復(fù)合物，共同介導(dǎo)了腫瘤耐藥的發(fā)生。對于二者是否相互調(diào)控及其在乳腺癌耐藥中的作用仍不明確。本研究旨在明確CD147是否調(diào)控了ABCG2的表達和功能及其調(diào)控機制和對乳腺癌化療耐藥的影響，為逆轉(zhuǎn)乳腺癌化療耐藥提供新的靶分子。
　　研究目的:
　　1.探討CD147是否調(diào)控ABCG2的表達和功能。
　　2.探討CD147調(diào)控ABCG2功能的內(nèi)在機制。
　　3.探討CD147調(diào)控ABCG2對乳腺癌化療耐藥的影響。

3、>　　研究方法:
　　1.構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染CD147和/或ABCG2的細胞MCF-7/Control，MCF-7/CD147,MCF-7/ABCG2,MCF-7/CD147+ABCG2(簡稱為MCF-7/Con, MCF-7/C, MCF-7/B, MCF-7/C+B)。
　　2.Western Blot和RT-PCR檢測四株細胞中CD147和ABCG2的表達，并分析四種細胞株中ABCG2的表達差異和CD147的相關(guān)性。

4、　　3.運用MTT法檢測四種細胞株對臨床化療藥物表柔比星(ABCG2底物)和5-氟尿嘧啶（非ABCG2底物）的敏感性。
　　4.選取合適濃度的米托蒽醌誘導(dǎo)MCF-7/Con和MCF-7/C細胞ABCG2的表達，并分析不同作用時間點下兩種細胞ABCG2蛋白和mRNA表達的差異。
　　5.Western Blot檢測四株細胞中ABCG2同源二聚體的表達，并分析CD147對其表達的影響。
　　6.免疫熒光觀察二者在四株細胞中

5、的定位及共存情況，并分析CD147對ABCG2定位的影響。
　　7.免疫共沉淀檢測CD147與ABCG2在MCF-7/C+B細胞中是否形成復(fù)合物。
　　8.免疫組織化學檢測臨床乳腺浸潤性導(dǎo)管癌化療耐藥/敏感組以及正常乳腺組織中CD147和ABCG2的表達情況，并分析兩者表達的相關(guān)性及其與耐藥的關(guān)系。
　　研究結(jié)果:
　　1.成功建立高表達CD147和/或ABCG2的細胞株MCF-7/Con，MCF-7/C，MCF

6、-7/B，MCF-7/C+B用于開展后續(xù)的研究工作。
　　2.與MCF-7/B比較，MCF-7/C+B細胞中的ABCG2蛋白表達顯著性增高（P＜0.05），而其mRNA水平無顯著性差異。
　　3.MCF-7/C+B與MCF-7/B，MCF-7/C與MCF-7/Con之間對表柔比星的敏感性存在統(tǒng)計學差異（P均＜0.05），IC50分別為17.09±1.7uM,10.13±0.55uM和2.76±0.07uM,0.98±0.06

7、uM。而MCF-7/C+B與MCF-7/C，MCF-7/B與MCF-7/Con之間對于5-氟尿嘧啶的敏感性無顯著性差異（P均＞0.05），IC50分別為1339.33±37.68uM，1275.4±19.89uM和478.94±42.13uM，413.95±17.55uM。這提示CD147通過影響ABCG2的功能進而介導(dǎo)了乳腺癌細胞對表柔比星的耐藥。
　　4.在米托蒽醌誘導(dǎo)下，MCF-7/Con和MCF-7/C細胞中的ABCG2蛋

8、白和mRNA表達上調(diào)具有時間依賴性，并且兩種細胞中的ABCG2蛋白在各個時間點均有顯著性差異(P＜0.05)但其mRNA無顯著性差異。提示CD147可調(diào)控ABCG2的蛋白表達。
　　5.相較于MCF-7/B細胞，MCF-7/C+B細胞中的ABCG2同源二聚體表達顯著性升高(P＜0.001)，提示CD147可影響ABCG2的同源二聚體形成。
　　6.與MCF-7/B相比較，MCF-7/C+B中ABCG2更多聚集在膜上，CD14

9、7與ABCG2在膜上共存。
　　7.免疫共沉淀顯示CD147與ABCG2在MCF-7/C+B細胞中以復(fù)合物形式存在。
　　8.乳腺浸潤性導(dǎo)管癌化療抵抗組CD147及ABCG2表達明顯強于化療敏感組，部分組織細胞出現(xiàn)了ABCG2的胞膜聚集現(xiàn)象。CD147與ABCG2表達存在相關(guān)性(P＜0.05)。
　　結(jié)論
　　1.在乳腺癌細胞中，CD147調(diào)控ABCG2的蛋白表達和功能，可能通過影響其細胞內(nèi)定位和二聚體的形成來影