靈杞黃斑顆粒對視網膜光損傷的保護作用及機制.pdf

1、目的：觀察大鼠視網膜光損傷的病理形態(tài)、電生理、生化及凋亡相關指標的改變；探討中藥靈杞黃斑顆粒復方對大鼠視網膜光損傷的保護作用及其機制。 方法：1.建立大鼠視網膜光損傷模型，研究靈杞黃斑顆粒對光損傷大鼠視網膜病理形態(tài)和視功能的保護作用。采用自制光損傷箱，白色熒光燈，光照強度平均為2800±150Lux，持續(xù)照射5小時建立大鼠視網膜光損傷模型。隨機分為空白對照組、光損傷給水組和光損傷給藥組。于造模前10天開始給予靈杞黃斑顆?；蛘麴s水

2、灌胃，每日一次，至實驗結束。光照后7天取眼球行病理切片檢測，HE染色，光照后14天，進行視網膜電圖(ERG)的檢測、視網膜病理切片檢測及視網膜外核層計數；按照上述方法，在光照后3天取眼球進行電鏡觀察，在第5天，10天取大鼠眼球，做石蠟切片，進行HE染色，觀察形態(tài)改變。2.光照后3天，取眼球進行視網膜電鏡檢測，做石蠟切片，進行凋亡原位檢測(TUNEL)標記細胞凋亡。3.測定光照后1天各組大鼠視網膜SOD、GSH-Px、CAT活性及MDA含

3、量變化。4.使用高效液相色譜儀測定光照后14天各組視網膜游離氨基酸的變化。5.通過實時熒光定量PCR和免疫蛋白印跡(westernblot)分析大鼠視網膜光損傷凋亡信號轉導分子的轉錄表達。6.運用免疫組化方法觀察光照后14天大鼠視網膜GFAP表達的變化。 結果：1.成功建立大鼠視網膜光損傷模型，光照后7天和14天HE染色形態(tài)觀察顯示，光損傷給藥組視網膜形態(tài)保存較完整，光照后14天，外核層計數顯著多于光損傷給水組。光照后14天ER

4、G檢測表明，光損傷給水組大鼠視功能顯著下降，光損傷給藥組a、b波振幅及OPs波總振幅明顯高于光損傷給水組。2.光照后3天電鏡結果顯示，光損傷給水組視網膜色素上皮細胞欠完整，微絨毛消失，光感受器外段紊亂，斷裂甚至消失，外核層細胞核固縮，細胞間隙增寬，呈凋亡形態(tài)改變；而光損傷給藥組形態(tài)相對完好，感受器外段排列相對規(guī)整，外核層有少量空泡變，僅見散在固縮的凋亡細胞核。TUNEL結果發(fā)現，光照后3天視網膜外核層出現大量陽性著染細胞核，而光損傷給藥

5、組僅見散在的少量黃色TUNEL陽性著色的感光細胞核。3.光照后1天，與光損傷給水組比較，光損傷給藥組大鼠視網膜SOD、GSH-Px、CAT活性顯著增高，MDA含量明顯降低。4.光照后14天，大鼠視網膜天谷氨酸(Glu)、天門冬氨酸(Asp)、甘氨酸(Gly)、?；撬?Tau)、γ-氨基丁酸(GABA)含量增高，與光損傷給水組比較，光損傷給藥組視網膜氨基酸含量顯著降低。5.光照后，光損傷給水組c-fos、caspase-3mRNA和蛋白表

6、達上調，顯著高于光損傷給藥組，而bcl-xLmRNA和蛋白表達下調，光損傷給藥組表達顯著高于給水組。6.光照后14d，光損傷給水組GFAP表達增高，光損傷給藥組表達相對較低。 結論：1.靈杞黃斑顆粒對光損傷大鼠視網膜形態(tài)、功能具有保護作用。2.靈杞黃斑顆粒能夠明顯減輕光照引起的視網膜氧化應激損傷，發(fā)揮其抗氧化作用；調控視網膜氨基酸類神經遞質的異常，改善視網膜神經組織細胞的生物循環(huán)與代謝。3.靈杞黃斑顆粒通過下調c-fos、cas