宮頸癌原代細胞的分離及腫瘤干細胞標記物的檢測.pdf

1、背景與目的:
　　宮頸癌是危害婦女健康的主要惡性腫瘤之一，盡管人類從未停止過對宮頸癌的研究，并取得了很大突破，但是宮頸癌仍是嚴重威脅廣大婦女身心健康的危險因素之一。隨著腫瘤干細胞學說的興起，宮頸癌干細胞的研究也逐漸起步，研究人員試圖通過尋找宮頸癌干細胞為宮頸癌的診治開辟新路。標記物的研究是宮頸癌干細胞研究的前提，目前已發(fā)現(xiàn)了一些可能成為腫瘤干細胞的標記物，如CD44、CD24、CD133、ABCG2等，但這些標記物是否可以成為宮頸

2、癌干細胞的標記物，仍需要更多的研究來證實。本研究結合目前腫瘤干細胞的研究成果，對宮頸癌原代細胞進行分離和培養(yǎng)，并采用流式細胞儀檢測腫瘤干細胞標記物CD44和CD24在宮頸癌原代細胞中是否有表達，同時檢測其在外周血中的表達;此外，本實驗采用免疫組化和免疫熒光雙染法定位檢測兩種標記物在宮頸癌中的表達，以豐富實體瘤的研究。
　　方法:
　　收集2011年10月1日至2012年10月1日在河南省鄭州大學第一附屬醫(yī)院行婦科手術的宮頸癌

3、患者標本（包括癌組織和外周血），臨床分期(ⅠA～ⅡB期)16例，按國際婦產科聯(lián)盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO)分期標準:ⅠA期4例、ⅠB期5例、ⅡA期4例和ⅡB期3例。癌組織病理類型為浸潤性鱗狀上皮癌，患者中位年齡56歲(32～71歲);同期河南省鄭州大學第一附屬醫(yī)院婦科行子宮全切術的正常宮頸組織10例作為對照;患者中位年齡43歲(26～63歲)。

4、首先應用蛋白酶消化法分離宮頸癌組織，然后用腫瘤干細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)分離出的懸浮細胞，培養(yǎng)一段時間后，因原代細胞雜質較多，再用淋巴細胞分離液分離可得到較為純凈的細胞球。外周血的分離采用淋巴細胞分離液分離以獲得單個核細胞;然后應用流式細胞儀檢測腫瘤干細胞標記物CD44和CD24在宮頸癌原代細胞及外周血中的表達情況，最后應用免疫組化和免疫熒光雙染的方法檢測CD44和CD24在宮頸癌組織的表達情況。
　　結果:
　　1.宮頸癌原代培養(yǎng)過

5、程顯示:采用蛋白酶消化法和腫瘤干細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)能得到宮頸癌懸浮細胞球;但在正常宮頸組織無法得到懸浮細胞球。
　　2.流式細胞儀檢測腫瘤干細胞標記物CD44和CD24，結果顯示在宮頸癌懸浮細胞球表面表和外周血中均有CD44和CD24表達，而且有CD44+單陽，CD24+單陽，CD44+CD24+雙陽的細胞群;但在正常宮頸組織和健康對照者外周血中無CD44和CD24的表達。
　　3.免疫組化顯示:CD44和CD24表達于宮頸癌組