復方苦參注射液及其與奧沙利鉑和恩度聯合抑制肝癌細胞增殖及誘導凋亡的研究.pdf

1、目的：通過體外實驗觀察復方苦參注射液及其與第三代鉑類化療藥物奧沙利鉑和抗腫瘤血管生成藥物重組人血管內皮抑制素（恩度）聯合作用于人肝癌細胞株的效果，并探討其相關的作用機制，為中藥與化療及抗腫瘤血管生成治療聯合應用提供理論依據。 方法：將不同濃度的復方苦參注射液、奧沙利鉑、恩度單藥以及聯合作用于體外培養(yǎng)的人肝癌細胞株SMMC-7721，使用不同的技術檢測細胞生長狀況：（1）MTT法分析不同濃度和作用時間的藥物對細胞增殖的抑制效果；（

2、2）倒置顯微鏡觀察細胞的形態(tài)學變化；（3）熒光顯微鏡觀察細胞凋亡的形態(tài)變化特征；（4）流式細胞術檢測細胞周期的分布改變；（5）原位末端標記法（TUNEL）檢測凋亡細胞的細胞核著色情況；（6）免疫細胞化學法檢測細胞凋亡相關蛋白Survivin、Bcl-2、Caspase-3的表達。 結果：（1）復方苦參注射液對肝癌SMMC-7721細胞有抑制增殖的作用，且該作用具有時間、劑量依賴性；50μl/ml的復方苦參注射液與1μg/ml的奧

3、沙利鉑聯合作用48h后表現出協同作用，但與恩度聯合未見明顯增強；（2）光鏡下觀察，藥物作用后細胞體積變小，逐漸變圓，細胞間接觸變松；（3）熒光顯微鏡下觀察，細胞發(fā)生了明顯的早期凋亡和晚期凋亡，聯合奧沙利鉑組凋亡細胞比例顯著升高；（4）流式細胞術檢測顯示藥物組G0/G1期細胞比例升高，S期比例下降，細胞被阻滯于G0/G1期；（5）原位末端標記法（TUNEL）檢測到藥物作用后，凋亡細胞的細胞核被染成深褐色，當聯合奧沙利鉑后凋亡指數顯著升高，

4、而聯合恩度未見明顯變化；（6）免疫細胞化學法顯示藥物作用后，SMMC-7721細胞Survivin、Bcl-2蛋白的表達較對照組減弱（P<0.01），Caspase-3的表達增高（P<0.01），當聯合奧沙利鉑后，這種作用得到顯著加強（P<0.01），而聯合恩度未見明顯變化。 結論：復方苦參注射液對肝癌SMMC-7721細胞有抑制增殖的作用，該作用可能是通過將細胞阻滯于G0/G1期，同時下調Survivin、Bcl-2的表達，上