長春新堿對大鼠小腸肌電及動力影響機制的研究.pdf

1、長春新堿(Vincristine,VCR)是夾竹桃科植物長春花中提出的二吲哚類化合物,為臨床常用抗腫瘤藥物,主要用于血液病、消化道等腫瘤的治療。VCR通過作用于細胞微管蛋白而干擾腫瘤細胞代謝。胃腸道動力改變是其主要毒副作用之一,臨床表現(xiàn)多樣,以腹痛、便秘常見,偶見麻痹性腸梗阻。目前VCR對胃腸道動力影響的作用機制尚不明確。 慢波是胃腸運動的基本節(jié)律,Cajal間質細胞(interstitial cells of Caial,IC

2、C)是慢波的起搏細胞,并參與神經、肌肉之間的信息傳遞,調控胃腸道運動。ICC的數(shù)量及功能異常與多種胃腸運動障礙性疾病的發(fā)生有關。 腸神經系統(tǒng)在胃腸道形成廣泛神經網絡,調節(jié)胃腸道大部分生理及病理過程,并與中樞神經系統(tǒng)及Cajal間質細胞密切聯(lián)系。肌間神經叢(Auerbach's plexus)：位于內環(huán)肌與外縱肌之間,主要協(xié)調平滑肌運動。 5-羥色胺(Serotonin,5-HT)為單胺類神經遞質,具有多種生物學功能。5-

3、HT及其受體廣泛存在于中樞神經系統(tǒng)、周圍神經系統(tǒng)和胃腸道,參與神經、胃腸道功能的調節(jié)。除胃腸道平滑肌外,其受體還存在于壁細胞、腸粘膜上皮細胞、腸肌間神經叢和EC上,少數(shù)分布于ICC上。5-HT受體與胃腸道功能密切相關的是5-HT1、5-HT2、5-HT3、5-HL4、5-HT7受體。莫沙必利為苯丙酰胺類衍生物,作為5-HT4受體激動劑可促進胃腸運動,在臨床廣泛應用于胃腸動力障礙的治療。 本實驗利用小腸在體電極埋置模型,通過研究V

4、CR對清醒大鼠小腸肌電和動力的作用；VCR對小腸ICC和腸肌間神經元的作用；莫沙必利對VCR引起的小腸動力障礙的治療效果,進一步探討VCR對小腸肌電和動力的作用機制以及相關治療。 第一部分：長春新堿對大鼠小腸肌電和動力作用的研究 目的:探討長春新堿對清醒大鼠小腸肌電和動力的影響,以闡明長春新堿對小腸動力的作用方式。 方法:SD大鼠24只,隨機分為4組：0.9％氯化鈉對照組；VCR0.25mg/kg組；VCR0.5

5、mg/kg組；VCR 0.75mg/kg組；尾靜脈注射藥物。通過小腸在體電極埋置模型,采用生物機能實驗系統(tǒng)記錄基礎值、用藥當日、用藥后第3日小腸慢波的頻率、曲線下面積,MMC周期、MMCⅢ相持續(xù)時間；通過碳素墨汁灌胃測定VCR用藥后第3日的小腸推進率。 結果:長春新堿0.25mg/kg組對小腸肌電無明顯改變。VCR 0.5mg/kg,0.75mg/kg組均出現(xiàn)小腸肌電活動異常,隨作用時間不同表現(xiàn)不同。靜注(51±14.27)mi

6、n 后MMC模式被連續(xù)性峰電取代,(78.33±13.08)min后MMC逐漸恢復,周期縮短,差異有統(tǒng)計學意義(F=28.078,P<0.01)。用藥后第3日,VCR 0.5mg/kg,0.75mg/kg每組6只大鼠中各4只小腸MMC模式被打斷,代之以不規(guī)則的峰電活動。慢波形態(tài)紊亂,兩組曲線下面積分別為(2.43±0.65)mv·s和(2.49±0.64)mv·s較對照組(3.83±0.57)mv.s降低(F=9.764,P<0.01)

7、。VCR 0.75mg/kg組的小腸推進率(3 3.59±1.43)％較對照組(60.34±2.41)％減慢(t=23.36,P<0.01)。 結論:長春新堿引起大鼠小腸肌電和動力的改變,并與作用時期相關,早期小腸肌電活動增強,后期小腸肌電及動力減弱。 第二部分：長春新堿對大鼠小腸Cajal間質細胞及腸肌間神經元作用的研究 目的:探討長春新堿對大鼠小腸Ca-ial間質細胞及腸肌間神經元的作用,以闡明長春新堿引起小

8、腸動力變化的機制。 方法: SD大鼠12只,隨機分為2組：對照組；VCR0.75mg/kg組,尾靜脈注射藥物。VCR用藥后第3日,行心臟灌注、小腸組織整裝鋪片,通過免疫熒光染色觀察小腸Cajal間質細胞及腸肌間神經元的陽性面積比、平均光密度、累積光密度(IOD),行半定量分析。 結果: VCR組ICC陽性面積比(5.84±3.11)％較對照組(24.90±1.86)％減少(t=20.357,P<0.01),IOD(240

9、0504.4±1325052.7)較對照組(6780957.9±1683911.3)減少(t=7.918,P<0.01)。腸肌間神經元陽性面積比(14.37±2.00)％和IOD(3062216.6±708334.2)與對照組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 結論: VCR用藥后第3日小腸ICC表達下降,腸肌間神經元無明顯變化。推測ICC的損傷為VCR后期小腸動力障礙的主要原因。 第三部分：長春新堿對大鼠小腸Cajal

10、間質細胞超微結構的影響 目的:觀察長春新堿對大鼠小腸Ca-ial間質細胞超微結構的影響,以進一步闡明長春新堿對小腸動力影響的機制。 方法: SD大鼠12只,隨機分為2組：對照組；VCR0.75mg/kg組,尾靜脈注射藥物。VCR用藥后第3日處死大鼠,取新鮮部分小腸組織,行透射電鏡檢查。 結果: VCR用藥組大鼠小腸Ca.jal間質細胞正常超微結構破壞,表現(xiàn)為細胞突起明顯減少或消失.許多末梢突起破裂,失去胞漿內容物

11、。細胞核皺縮,異染色質趨邊,呈斑塊狀。胞漿內細胞器數(shù)量明顯減少,結構出現(xiàn)異常。 結論: VCR用藥后第3日小腸Cajal間質細胞受損。推測Cajal間質細胞的損傷為VCR后期小腸動力障礙的主要原因。 第四部分：莫沙必利對長春新堿引起的大鼠小腸動力障礙作用的研究 目的:探討5-羥色胺4受體激動劑莫沙必利對長春新堿引起的大鼠小腸動力障礙的影響,進一步為臨床改善VCR所致消化道副作用提供實驗依據(jù)。 方法: SD

12、大鼠12只,隨機分為2組:VCR+0.9％氯化鈉灌胃組；VCR+莫沙必利灌胃組,尾靜脈注射VCR0.75mg/kg后第1日開始行莫沙必利1.5mg/kg灌胃,連續(xù)3日。通過小腸在體電極埋置模型,采用生物機能實驗系統(tǒng)記錄基礎值、VCR用藥當日、VCR用藥后第3日小腸慢波的頻率、曲線下面積,MMC周期、MMCⅢ相持續(xù)時間;通過碳素墨汁灌胃測定VCR用藥后第3日的小腸推進率。 結果: VCR用藥后第3日,莫沙必利組6只大鼠中有2只,生