HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭患者T淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞功能障礙的研究.pdf

1、第一部分 HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭患者外周血CD4+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與傳統(tǒng)T細(xì)胞失衡的研究
　　目的：近年來，慢加急性肝衰竭（ACLF）患者免疫功能障礙，尤其是固有免疫功能障礙的病理生理作用得到了廣泛研究，然而在適應(yīng)性免疫失調(diào)方面的研究仍較缺乏。本研究有三個目的：1）評定乙型病毒性肝炎（HBV）相關(guān)ACLF患者外周血CD3+T淋巴細(xì)胞的數(shù)目改變；2）探討外周血CD4+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）與傳統(tǒng)T細(xì)胞（Tconv）之間的平衡問題，

2、并進(jìn)一步分析Tregs亞群比例的變化；3）評估CD4+Tregs及其各亞群的免疫抑制能力。
　　方法：從2011年8月至2013年3月收集20例HBV相關(guān)ACLF患者入院后首次留取的外周血標(biāo)本，同期納入10例膿毒血癥休克患者、20例慢性乙型病毒性肝炎（CHB）患者和20名健康志愿者作為對照組。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)，我們進(jìn)行外周血CD3+T細(xì)胞及其亞群的絕對數(shù)量檢測、CD4+Tregs的表型染色（表面分子CD25和CD45RA）和CD4+

3、T細(xì)胞胞內(nèi)FoxP3和IL-17染色。最后，應(yīng)用CFSE染色測定CD4+Tregs及其各亞群在體外對Tconv增殖的抑制能力。
　　結(jié)果：與健康對照組（HC）和 CHB組相比，HBV相關(guān) ACLF組和膿毒血癥休克組患者外周血 CD3+ T及 CD3+CD4+ T和CD3+CD8+T細(xì)胞的數(shù)目均顯著減少，且兩組之間沒有明顯差異；其中，CD4+Tregs的數(shù)量沒有改變而Tconv的數(shù)目顯著減少，使得CD4+Tregs與Tconv的比例

4、明顯升高，且膿毒血癥休克組高于HBV相關(guān)ACLF組。此外，HBV相關(guān)ACLF組CD4+Tregs與Th17的比值高于HC組和CHB組。對Tregs進(jìn)行亞群分析，我們發(fā)現(xiàn)HBV相關(guān)ACLF組Treg-Ⅱ and-Ⅲ亞群占CD4+T細(xì)胞的比例顯著高于對照組，但是Treg-Ⅰ與HC組相比無明顯差異。體外功能試驗顯示，HBV相關(guān)ACLF患者整群CD4+Tregs的體外抑制功能與HC和CHB組相比無明顯差異，但各亞群的抑制能力各不相同，Treg-

5、Ⅱ最強(qiáng)，Treg-Ⅰ次之，Treg-Ⅲ最弱。
　　結(jié)論：同膿毒血癥休克組類似，HBV相關(guān)ACLF患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞發(fā)生明顯耗竭，且以Tconv的耗竭為主；發(fā)揮免疫負(fù)調(diào)作用的CD4+Tregs與Tconv的平衡被打破，前者明顯占優(yōu)勢。正如膿毒血癥休克中報道，這種失衡很可能在HBV相關(guān)ACLF的適應(yīng)性免疫功能障礙中發(fā)揮了重要的作用。
　　第二部分 HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭患者外周血單核細(xì)胞吞噬功能障礙的研究
　　

6、目的：單核細(xì)胞功能障礙是慢加急性肝衰竭（ACLF）患者發(fā)生免疫功能紊亂的一個重要特征，主要表現(xiàn)為單核細(xì)胞表面人類白細(xì)胞DR抗原（HLA-DR）的表達(dá)下調(diào)，分泌促炎性細(xì)胞因子的水平下降、分泌抑炎性細(xì)胞因子的水平升高。本文旨在探討乙型肝炎病毒（HBV）相關(guān) ACLF患者外周血單核細(xì)胞吞噬功能的變化和可能的機(jī)制及與臨床預(yù)后的相關(guān)性。
　　方法：自2011年9月至2013年1月收集15例HBV相關(guān)ACLF患者外周血標(biāo)本，同期納入12例慢性

7、乙型病毒性肝炎（CHB）患者和20例健康志愿者（HC）作為對照組；同時，根據(jù)患者病情的轉(zhuǎn)歸將ACLF患者進(jìn)一步分為好轉(zhuǎn)組（7例）和未好轉(zhuǎn)組（8例）。利用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行外周血單核細(xì)胞的表型染色，并進(jìn)行了體外吞噬試驗檢測單核細(xì)胞的吞噬能力。
　　結(jié)果：與HC和CHB組相比，HBV相關(guān)ACLF患者外周血單核細(xì)胞吞噬beads的百分比[beads(+)％]顯著降低；beads-FITC的幾何平均熒光強(qiáng)度（GMFI）略低于HC組，但無統(tǒng)計學(xué)

8、差異。HBV相關(guān)ACLF組單核細(xì)胞表面程序性細(xì)胞死亡-1（PD-1）分子表達(dá)明顯高于HC和CHB組；加入PD-1阻斷抗體后，ACLF患者外周血整群單核細(xì)胞beads(+)%和GMFI均明顯回升。對單核細(xì)胞進(jìn)行亞群分析發(fā)現(xiàn)，HBV相關(guān)ACLF患者CD14+CD16-(Mo1)亞群的beads(+)%顯著低于對照組；其中一群新的CD14lowCD16-單核亞群（Mo0）的beads(+)%明顯低于同組經(jīng)典的CD14highCD16-(Mo1

9、’)單核亞群和HC組、CHB組的經(jīng)典Mo1（CD14+CD16-）亞群。此外，我們發(fā)現(xiàn)HBV相關(guān)ACLF未好轉(zhuǎn)組外周血單核細(xì)胞的beads(+)%顯著低于好轉(zhuǎn)組。
　　結(jié)論：外周血單核細(xì)胞吞噬功能障礙是HBV相關(guān)ACLF患者免疫紊亂的一個重要特征，尤以新亞群Mo0和經(jīng)典Mo1’的吞噬能力障礙為主；PD-1阻斷后可以明顯逆轉(zhuǎn)單核細(xì)胞的吞噬功能障礙，因此抗PD-1抗體有望成為緩解HBV相關(guān)ACLF免疫抑制狀態(tài)的有效策略。單核細(xì)胞吞噬功