p38蛋白激酶對P-糖蛋白介導的難治性癲癇耐藥的影響.pdf

1、大約30％左右的癲癇患者對抗癲癇藥(antiepileptic drugs，AEDs)不敏感，出現難以被控制的反復發(fā)作，稱之為藥物難治性癲癇。多藥轉運體P-糖蛋白(P-glycoprotein，PGP)介導的難治性癲癇耐藥已被國內外公認。因其能識別多種不同作用機制的AEDs，主動將藥物泵出血腦屏障，引起腦內藥物濃度下降，從而導致耐藥。但PGP表達上調的分子機制目前尚未清楚。p38蛋白激酶(p38mitogen-activated pro

2、tein kinase，p38 MAPK)是MAPK家族的最新成員，主要通過激活一些轉錄因子和其它的蛋白酶而產生一定的生物學效應。目前認為，p38MAPK信號通路主要參與應激條件下細胞的免疫調節(jié)、炎癥反應、缺血/再灌注損傷和細胞凋亡過程。文獻證實有許多的因素可以誘導多藥轉運體PGP表達，如細胞毒性藥物、放射線照射、熱休克等應激變化。而這些因素恰恰也是激活p38MAPK信號轉導途徑的誘因。同時體外試驗發(fā)現MAPKs信號轉導通路參與了腫瘤細

3、胞的多藥耐藥。以上提示p38 MAPK可能參與了PGP介導的難治性癲癇的耐藥。
　　本課題采用免疫組化、Western-Blot、微透析、高效液相色譜技術等，在不同標本上（整體動物，動物腦組織），研究p38 MAPK途徑對PGP表達及難治性癲癇耐藥的影響。
　　本課題主要包括兩個部分:
　　第一部分:p38蛋白激酶對大鼠腦內P-糖蛋白表達和行為學的影響
　　建立慢性戊四氮點燃癲癇動物模型，采用免疫熒光和Weste

4、rn-Blot的方法，在癲癇模型上觀察p38 MAPK拮抗劑對腦內PGP表達及大鼠行為學的影響。
　　第二部分:p38蛋白激酶對癲癇大鼠海馬細胞外液抗癲癇藥物濃度的影響
　　建立慢性戊四氮點燃癲癇動物模型，采用微透析技術和高效液相色譜技術，通過腹腔注射VPA和LTG，觀察在癲癇和正常大鼠海馬細胞外液AEDs的濃度差異;觀察海馬局部給予p38 MAPK拮抗劑SB202190后，癲癇大鼠海馬細胞外液中AEDs的濃度變化。

5、　　實驗結果
　　第一部分:癲癇組大鼠腦內p38MAPK和PGP的表達顯著高于對照組(p＜0.01);給予p38 MAPK拮抗劑SB202190后，癲癇大鼠腦內p38 MAPK和PGP的表達明顯下降（p＜0.05），癲癇發(fā)作級別及次數明顯下降(p＜0.05)。
　　第二部分:(1)癲癇組與正常組比較，給藥后30-120min VPA濃度均降低(p＜0.05)，而給藥后150min二者無明顯差異(p＞0.05);SB20219

6、0組與癲癇組比較，給藥后30-120min VPA濃度均升高(p＜0.05)，而給藥后150min二者無明顯差異(p＞0.05)。(2)癲癇組與正常組比較，給藥后30-90min及150min LTG濃度降低(p＜0.05)，而120min二者無明顯差異(p＞0.05);SB202190組與癲癇組比較，給藥后各時間點LTG濃度均升高(p＜0.05)。(3)癲癇組與SB202190組VPA峰濃度出現時間一致，均為60min，較正常組(30

7、min)后移;(4)癲癇組與SB202190組LTG峰濃度出現時間一致，均為90min，較正常組(60min)后移。
　　綜上所述，通過本實驗研究得出以下結論:
　　1.p38MAPK拮抗劑SB202190可以減少癲癇大鼠腦內的PGP表達，表明p38MAPK信號轉導途徑參與了PGP的表達;阻斷p38 MAPK信號通路可以降低大鼠點燃后的發(fā)作分級。
　　2.p38MAPK拮抗劑SB202190可以提高癲癇大鼠海馬細胞外液