KiSs-1-GPR54系統(tǒng)在小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞蛻膜化中的作用及其機(jī)制.pdf

1、目的:
　　探討KISS-1/GPR54系統(tǒng)在子宮內(nèi)膜的表達(dá)、定位及其在蛻膜化中作用。
　　方法:
　　1、通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR、免疫組織化學(xué)等方法觀察小鼠圍植入期子宮內(nèi)膜組織中KISS-1和GPR54的表達(dá)水平及表達(dá)部位變化。
　　2、運(yùn)用在體人工蛻膜化模型，觀察KISS-1、GPR54的表達(dá)是否受活化胚胎的影響。
　　3、構(gòu)建去卵巢及性甾體激素處理的子宮模型，觀察甾體激素對(duì)KISS-1和GPR54表達(dá)的影

2、響。
　　4、通過(guò)子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞分離、培養(yǎng)及體外誘導(dǎo)分化，檢測(cè)在離休狀態(tài)下蛻膜化過(guò)程中KISS-1、GPR54表達(dá)水平的變化。
　　5、通過(guò)RNA干擾技術(shù)，觀察KISS-1對(duì)小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞蛻膜化的影響。
　　結(jié)果:
　　1、實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示，在妊娠D1-D5天，KISS-1、GPR54 mRNA表達(dá)量均較低。隨著蛻膜化的進(jìn)程（妊娠D6-D8天），與妊娠D1天相比，KiSS-1和GPR54 mRNA的

3、表達(dá)量均顯著性增加(P＜0.01)。免疫組化結(jié)果顯示，在小鼠妊娠D1-4天，KiSS-1和GPR54蛋白主要定位于腔上皮和腺上皮細(xì)胞上，且表達(dá)水平較低，與實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果相一致。從妊娠D5天開(kāi)始，KiSS-1和GPR54蛋白的表達(dá)量均顯著性增加，主要表達(dá)于圍繞胚胎的子宮蛻膜組織。
　　2、在在體的人工誘導(dǎo)蛻膜化模型中，與對(duì)照組相比，注射芝麻油一側(cè)的子宮角隨著時(shí)間的延長(zhǎng)（假孕D5至8天）逐漸增大，而對(duì)照組子宮角沒(méi)有明顯變化。在人工

4、誘導(dǎo)蛻膜化的子宮組織，KiSS-1、GPR54 mRNA表達(dá)水平均隨著蛻膜的進(jìn)展逐漸增加，至假孕第8天達(dá)到最高峰。在假孕第5天，KiSS-1、GPR54蛋白主要表達(dá)于腔上皮，且信號(hào)較弱，然而在假孕第6天，蛻膜組織中KISS-1、GPR54蛋白信號(hào)均顯著性增加，并隨著蛻膜化的進(jìn)程逐漸增加。
　　3、在去卵巢的子宮組織中，KISS-1 mRNA表達(dá)水平比較低。經(jīng)E2、P4或E2+P4處理后，與對(duì)照組相比（芝麻油處理組），KISS-1

5、mRNA表達(dá)水平均顯著增加(均為P＜0.01)，并于注射后的3h達(dá)到高峰;P4與其拮抗劑RU486共同處理組沒(méi)有明顯增大(P＞0.05);E2與其拮抗劑Tam共同處理組，則進(jìn)一步增強(qiáng)E2對(duì)KISS-1 mRNA表達(dá)上調(diào)的效應(yīng)(P＜0.05)。
　　4、分離培養(yǎng)的小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞，免疫熒光法檢測(cè)顯示，基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)Vimentin而不表達(dá)Cytokeratin。在體外經(jīng)E2和P4聯(lián)合處理24-72h后，基質(zhì)細(xì)胞表現(xiàn)出的形態(tài)符合蛻膜

6、細(xì)胞的特異性形態(tài)學(xué)特征;免疫印跡法和定量PCR檢測(cè)顯示，蛻膜化的標(biāo)記分子，包括Cyclin D3蛋白、PR蛋白以及dPRP mRNA的表達(dá)水平在體外培養(yǎng)48h、72h后均顯著性增加。同時(shí)KISS-1和GPR54 mRNA的表達(dá)水平也隨時(shí)間逐漸增加。
　　5、在體外培養(yǎng)的子宮基質(zhì)細(xì)胞蛻膜化模型中，轉(zhuǎn)染KISS-1 siRNA后，與對(duì)照組相比（無(wú)義序列組），在培養(yǎng)后24h、48h、72h，KISS-1 mRNA表達(dá)水平均顯著性下降(P

7、＜0.01，0.05)，說(shuō)明KISS-1 siRNA能特異性抑制了KiSS-1mRNA的表達(dá)。KISS-1基因下調(diào)同時(shí)，蛻膜化的標(biāo)記分子dPRP(mRNA)、Cyclin D3（蛋白）和PR（蛋白）的表達(dá)水平也均相應(yīng)下調(diào)，提示KISS-1基因的下調(diào)能抑制子宮基質(zhì)細(xì)胞蛻膜化進(jìn)程。
　　結(jié)論:
　　在妊娠早期，KiSS-1/GPR54系統(tǒng)時(shí)空性的表達(dá)于母胎界面，且受E2、P4及子宮內(nèi)膜蛻膜化的影響;干涉KISS-1后子宮內(nèi)膜基質(zhì)