基于肝微粒體的T-2毒素體外代謝研究.pdf

1、作為單端孢霉烯族類(lèi)真菌毒素的重要代表,T-2毒素在目前已知的該類(lèi)毒素中毒性最強(qiáng),因其高毒性,T-2毒素被視為潛在的化學(xué)毒劑之一;另外,其亦是自然界存在的最危險(xiǎn)的食品污染源之一,近年來(lái)對(duì)糧農(nóng)作物造成了廣泛污染,對(duì)人類(lèi)的身體健康、食品安全等方面產(chǎn)生了巨大威脅。因此,T-2毒素的相關(guān)研究是近年來(lái)的研究熱點(diǎn)之一。T-2毒素在體內(nèi)代謝速率較快,其體內(nèi)持續(xù)毒性主要由代謝產(chǎn)物的毒性引起。因此,為深入闡明其毒性,對(duì)T-2毒素的代謝研究尤為重要。

2、　　以替代(replacement)、減少(reduction)和優(yōu)化(refinement)動(dòng)物試驗(yàn)為核心的“3R”運(yùn)動(dòng)逐漸被國(guó)際社會(huì)廣泛接受。肝臟是藥物毒物最重要的代謝器官,是生物轉(zhuǎn)化的主要場(chǎng)所。以肝臟為基礎(chǔ)的體外替代實(shí)驗(yàn),如肝微粒體和肝細(xì)胞,在“3R”運(yùn)動(dòng)中起著重要的作用,其以特有的優(yōu)勢(shì)和特點(diǎn)在外源性物質(zhì)代謝和毒性的研究中得到廣泛應(yīng)用。
　　本論文即旨在研究基于肝微粒體的T-2毒素的體外代謝,包括T-2毒素在肝微粒體中代謝的

3、種屬差異性,特別是T-2毒素在人肝微粒體中的代謝行為及和動(dòng)物之間的代謝差異性,研究不同酶系對(duì)T-2毒素的代謝作用,期望為T(mén)-2毒素代謝機(jī)理、代謝與毒性的關(guān)系以及與人類(lèi)健康的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、食品安全研究等提供實(shí)驗(yàn)資料和科學(xué)依據(jù)。
　　本論文共分為六章,第一章為文獻(xiàn)綜述,引述文獻(xiàn)70余篇,主要論述了近年來(lái)T-2毒素在分析方法、體內(nèi)外代謝等方面的研究進(jìn)展。
　　第二章為 T-2毒素的兩種代謝物即HT-2毒素、3’-OH T-2毒素的參考

4、品制備部分。在分離純化基礎(chǔ)上,對(duì)之進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征;
　　采用玉米酯酶對(duì)T-2毒素進(jìn)行特異性轉(zhuǎn)化,制備HT-2毒素,產(chǎn)率高達(dá)80％以上,該酶催化方法具有定向催化、條件溫和及產(chǎn)率高等特點(diǎn);采用體外肝 S9體系生物轉(zhuǎn)化的方法,將T-2毒素定向轉(zhuǎn)化為3’-OH T-2毒素,產(chǎn)率達(dá)30%以上。為后續(xù)的研究提供了物質(zhì)基礎(chǔ);
　　在此基礎(chǔ)上,第三章建立了基于液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)的T-2毒素及其主要代謝物的同時(shí)定量分析檢測(cè)方法。包括T-2毒素

5、及3’-OH T-2毒素在苯巴比妥誘導(dǎo)的大鼠肝S9中的定量檢測(cè)方法,及T-2毒素及其五種代謝物在肝微粒體和全血中的分析檢測(cè)方法。所建方法簡(jiǎn)單快速,靈敏度高,其回收率、精密度和準(zhǔn)確度均符合生物樣品定量分析的要求,展示了其用做體內(nèi)外代謝動(dòng)力學(xué)的良好應(yīng)用前景;
　　第四章的體外代謝研究表明,T-2毒素的肝微粒體代謝存在種屬差異性,肝固有清除率依次為人>小鼠>猴>比格犬>大鼠,然而肝清除率的順序?yàn)樾∈?猴>大鼠>比格犬>人;不同種屬肝微粒

6、體對(duì)T-2毒素的親和力和代謝能力存在差異。
　　第五章為T(mén)-2毒素在不同酶體系的體外代謝研究。在人肝微粒體中,多種細(xì)胞色素 P450(CYP)同工酶參與了 T-2毒素的代謝,包括 CYP3A4、CYP2E1、CYP1A2、CYP2C9、CYP2B6、CYP2D6、CYP2C19,其中CYP3A4為主要的代謝同工酶,主要以羥基化產(chǎn)物為主;肝微粒體中酯酶對(duì)T-2毒素代謝作用明顯,主要產(chǎn)物為HT-2毒素。不同酶系對(duì)T-2毒素的代謝速率不