急性髓系白血病細(xì)胞熱休克蛋白90的表達(dá)及其作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:本研究檢測HSP90在急性髓系白血病細(xì)胞中的表達(dá),分析其在初治、化療緩解期及復(fù)發(fā)時基因表達(dá)水平的變化,探討HSP90與急性白血病FAB分型及預(yù)后的關(guān)系。研究HSP90抑制劑對白血病細(xì)胞株HL-60的抑制作用及其可能的機(jī)制。
　　方法:采用RT-PCR的方法檢測初治、復(fù)發(fā)和緩解期急性髓系白血病患者其單個核細(xì)胞的HSP90mRNA表達(dá)水平,共80例(男45例,女35例),健康人員10人為正常對照組。分析HSP90mRNA表達(dá)水平

2、與FAB分型、與預(yù)后的關(guān)系。同時檢測髓系白血病細(xì)胞株HL-60為HSP90mRNA高表達(dá),故將其設(shè)為HSP90的陽性對照。應(yīng)用MTT法檢測HL-60細(xì)胞經(jīng)過不同濃度的HSP90抑制劑17-DMAG和不同時間處理而發(fā)生的抑制作用,應(yīng)用WesternBlot方法檢測HL-60細(xì)胞經(jīng)過不同濃度HSP90抑制劑處理后HSP90和Akt蛋白水平的變化。
　　結(jié)果:
　　1、HSP90mRNA在急性髓系白血病細(xì)胞株HL-60中均有明顯高

3、表達(dá):HSP90/β-actin的表達(dá)水平分別為0.523,初治患者中HSP90mRNA的陽性表達(dá)率為100％,平均表達(dá)水平為(HSP90/β-actin)為0.523±0.225,明顯高于正常對照組(表達(dá)率亦為100%,平均表達(dá)水平0.193±0.054),結(jié)果有顯著性差異(P<0.05)。
　　2、緩解組患者中HSP90mRNA表達(dá)水平為0.243±0.087,表達(dá)率100%,與正常對照組相比HSP90表達(dá)均無顯著性差異(P>

4、0.05)。但緩解組HSP90明顯低于初治組(P<0.05)。復(fù)發(fā)組患者中HSP90mRNA在復(fù)發(fā)組表達(dá)水平為0.875±0.194,高于正常對照組(P<0.05)。且與初治組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。
　　3、HSP90mRNA在FAB分型顯示出在M3亞型中低表達(dá),在M5亞型中高表達(dá)的趨勢。但各型之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　4、體外研究結(jié)果顯示,17-DMAG能抑制HL-60細(xì)胞的生長,并且隨著藥物濃度的升高、作用時間

5、的延長抑制率明顯提高,具有濃度、時間依賴性。
　　5、對于不同濃度17-DMAG、48小時處理的HL-60細(xì)胞,應(yīng)用WesternBlot方法檢測細(xì)胞中HSP90蛋白和Akt蛋白的表達(dá),HSP90蛋白和Akt蛋白含量隨著17-DMAG濃度的升高而出現(xiàn)下降趨勢。
　　結(jié)論:
　　1、在正常人、白血病細(xì)胞株HL-60和急性髓系白血病患者中均有HSP90mRNA的表達(dá)。在初治患者中有HSP90表達(dá)顯著升高,與正常人比較有顯著