肝細胞凝膠包埋培養(yǎng)用于藥物肝毒性的研究.pdf

1、體外篩選技術(shù)可以快速和早期地淘汰毒性過大的候選藥物，縮短開發(fā)周期，提高新藥開發(fā)的成功率，然而，目前的體外模型難以準確反映藥物的毒性行為。因此，本文以我們自主開發(fā)的體外組織化培養(yǎng)微型反應(yīng)器(形式為凝膠包埋肝細胞培養(yǎng)于中空纖維膜內(nèi))為基礎(chǔ)，以利福平和異煙肼為活性代謝產(chǎn)物導(dǎo)致肝毒性的代表藥物，四環(huán)素為致脂肪變性的代表藥物，胺碘酮為致磷脂變性的代表藥物，水楊酸鈉為線粒體毒性的代表藥物，分別驗證該微型反應(yīng)器用于藥物肝毒性檢測的可行性，并與傳統(tǒng)的單

2、層貼壁培養(yǎng)方式比較。
　　 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，微型反應(yīng)器內(nèi)大鼠肝細胞中檢出的毒性濃度與藥物在大鼠體內(nèi)產(chǎn)生毒性時的血藥濃度一致，且能正確反映藥物體內(nèi)毒性機理；而單層貼壁肝細胞對藥物毒性不敏感，且不能正確反映藥物體內(nèi)的毒理。其次，我們還利用微型反應(yīng)器培養(yǎng)的人肝細胞研究了利福平和異煙肼合用對人和大鼠肝毒性的種屬差異，研究結(jié)果也與大鼠和臨床報道的體內(nèi)結(jié)果一致。最后，該微型反應(yīng)器還用于篩選針對不同毒性機理的保肝藥物，我們發(fā)現(xiàn)中藥有效成分甘草酸可抗

3、活性代謝產(chǎn)物毒性，而苦參堿和水飛薊賓則可有效抑制胺碘酮導(dǎo)致的磷脂變性。
　　 由于在實驗中發(fā)現(xiàn)聚砜中空纖維膜對疏水性藥物(如胺碘酮和利福平)有嚴重的吸附，我們對聚砜膜材料進行聚乙二醇接枝以增加其親水性，并將接枝產(chǎn)物與聚砜共混制備得到親水中空纖維共混膜，從而極大降低了藥物的吸附，使重新構(gòu)建的中空纖維膜反應(yīng)器所反映的藥物肝毒性情況更接近體內(nèi)。
　　 總之，將肝細胞凝膠包埋培養(yǎng)于聚乙二醇親水改性的聚砜中空纖維膜微型反應(yīng)器中，可