一種新型抗VEGF靶向制劑的抗腫瘤血管生成作用機制研究.pdf

1、血管生成是腫瘤多步驟多階段發(fā)展過程中的八大標志之一，是腫瘤生長、侵襲、轉移和復發(fā)的先決條件。腫瘤的血管生成過程是一個復雜的生物學過程，包括血管內皮細胞的增殖、出芽和遷移等。與正常組織一樣，腫瘤依靠血管網(wǎng)絡來實現(xiàn)對營養(yǎng)物質的吸收和代謝產物的排泄。在眾多調控血管生成的內源性因子中，血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是目前研究最為徹底的一個。VEGF在胚胎發(fā)育和腫瘤的新生血管生成

2、中起到了關鍵的作用。VEGF主要通過激活血管內皮細胞的增殖和遷移，保持血管內皮細胞的完整和存活中發(fā)揮作用，是目前已知的唯一一個在腫瘤的整個生命周期中均有持續(xù)表達的血管生長因子。基于上述研究證據(jù)，VEGF被認為是抗腫瘤血管生成的一個理想的治療靶點。
　　 前期研究中我們成功克隆了靶向VEGF的FP3。FP3是一個靶向VEGF的全人源化的可溶性受體蛋白。它的結構包括了VEGFR1(Flt-1)的第二個胞外區(qū)域和VEGFR2(Flk-

3、1，KDR)的第三、四個胞外區(qū)域，將這些區(qū)域與人免疫球蛋白1(IgG1)的Fc片段基因融合構建融合蛋白。本課題旨在通過體外細胞實驗和體內裸鼠腫瘤模型研究FP3治療結腸癌的作用，并初步探索其內在的作用機制。
　　 具體研究內容如下：
　　 體外研究部分：MTT法檢測FP3對體外培養(yǎng)的血管內皮細胞系的增殖能力改變情況；劃痕試驗檢測FP3對血管內皮細胞遷移能力的影響；血管內皮細胞微管形成試驗檢測FP3對血管形成的影響；大鼠動脈

4、環(huán)出芽試驗檢測FP3對動脈環(huán)微血管出芽情況的作用；雞胚尿囊膜試驗檢測FP3對血管生成的影響。
　　 體內研究部分：采用LoVo結腸癌細胞株裸鼠皮下移植瘤模型研究FP3的體內治療結腸癌的作用和機制。通過定期測量各組瘤體體積，確定FP3對移植瘤有無抑制作用；治療結束后，對各組瘤組織用免疫組織化學的方法比較各組瘤體內微血管密度來揭示瘤內血管生成狀況，瘤內細胞增殖情況。
　　 研究結果：
　　 體外研究結果顯示：FP3能

5、抑制VEGF誘導的血管內皮細胞系HUVECs的增殖、遷移和微血管形成，并能抑制VEGF誘導的大鼠動脈環(huán)出芽和MCF-7乳腺癌細胞誘導的雞胚尿囊膜血管的生長。體內研究結果顯示：FP3能明顯抑制LoVo結腸癌細胞株移植瘤的生長和明顯抑制腫瘤細胞的增殖，明顯降低瘤內微血管密度，并且降低了結腸癌細胞的增殖能力。
　　 結論：體外細胞系研究和裸鼠體內腫瘤模型研究表明，新型抗血管藥物FP3具有明顯的體外和體內抗血管生成作用和體內抗腫瘤作用，