G6PD-6PGD比值法實驗條件優(yōu)化的探討和深圳地區(qū)居民G6PD基因突變型及其表達的研究.pdf

1、G-6-PD缺乏癥是一組累及全球約4億人的遺傳性溶血性疾病。也是中國南方高發(fā)的一種遺傳病。G-6-PD缺乏癥能致許多疾病，如某些藥物或食物引起的急性溶血性貧血，嚴重的慢性非球形紅細胞溶血性貧血，新生兒黃疸等。及時的產前診斷和正確的治療可以有效地預舫新生兒黃疸，該病已被母嬰保護法列為產前篩查的常規(guī)疾病之一。 G6PD缺乏癥的篩查目前主要應用生化方法。Lyon假說認為，攜帶突變的女性雜合子其表型有可能是正常的，這形成了女性雜合子表型

2、的復雜性，容易產生假陰性。 很多生化方法對女性雜合子檢出率不高。國內知名學者杜傳書教授在此領域做了大量研究工作并在20世紀80年代推薦用G6PD／6PGD比值法，由于該方法比以往的生化試驗有更高的檢出率，因此，我國南方大部分地區(qū)至今都在應用該方法。但如何能更好地提高對女性雜合子的檢出率，仍是廣大醫(yī)學工作者所關心的問題。隨著基因檢測方法的不斷成熟及應用，使我們有可能直接把女性雜合子人群作為研究對象，再反過來研究并優(yōu)化G6PD／6P

3、GD比值法的試驗條件，使其能更好地提高對女性雜合子的檢出率。本研究的第一部分是以我國常見的G6PD三種基因突變型即G1388A，G1376T，A95G女性雜合子為研究對象，以經基因檢測確診為G6PD基因突變的女性雜合子為“金標準”，在保留原G6PD／6PGD比值法試驗主要優(yōu)點的基礎上來研究G6PD／6PGD比值法的影響因素，經過統(tǒng)計分析找出G6PD／6PGD比值法的最佳工作條件，即在孵育溫度37℃，底物終濃度為0.78mmol／L G6

4、PNaz和0.195mmol／L NADP><'+>時，其最佳工作點為10分鐘． G6PD缺乏癥的根本原因是基因突變的結果。至今，全世界報導的G6PD基因突變型已超過150種，中國人的基因突變型已有21種。我們已經知道，一些G6PD突變型與臨床分型有一定的相關性，因此G6PD基因型的檢測對相關疾病的臨床診斷和預防具有重要意義。我們利用聚合酶鏈反應結合變性梯度凝膠電泳(PCR-DGGE)方法和測序技術，確定本地居民G6PD基因突

5、變型。我們發(fā)現(xiàn)G1376T，G1388A是深圳本地居民最常見的基因突變型。我們通過改良的熒光定量PCR法，檢測了G1376T，G1388A及正常人群的mRNA含量且用G6PD/6PGD比值法檢測了G1376T，G1388A兩類人群的G6PD酶活性。男性G1388A者的mRNA量與男性G1376T者的mRNA的量有顯著差異，前者明顯高于后者(P<0.05)。男性G1388A突變經G6PD/6PGD比值法測得的酶活性與男性G1376T有顯著