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文檔簡介
1、生殖道感染是危害男性生殖健康的主要因素之一，也是引起男性不育的重要原因。CRES蛋白—胱蛋白酶抑制劑相關的附睪精子發(fā)生蛋白(cystatin-relatedepididymalspermatogenicprotein)又稱為CST8，屬于胱蛋白酶抑制劑超家族中Family2即cyatatins的一個亞類。CRES蛋白特異地表達于小鼠睪丸和附睪，其表達譜具有明顯的年齡變化規(guī)律，提示其可能在精子發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用，但研究發(fā)現(xiàn)Cres基因
2、敲除小鼠生育力正常。CRES蛋白具有四個保守的半胱氨酸殘基，通過形成兩個二硫鍵來維持其三維結構。近年來，陸續(xù)有文獻報道CST3、CST11具有抗菌功能，這些報道促使我們研究該亞類中另一個成員—CRES蛋白是否也具有抗病原微生物功能。
首先，我們采用GST融合蛋白表達系統(tǒng)成功地表達純化了可溶性CRES蛋白(GST-CRES)。然后采用菌落形成單位法和分光光度測定法檢測CRES蛋白是否具有抗大腸桿菌（E.coli)和溶脲脲原體（U
3、reaplasmaurealyticum，Uu）的功能。結果顯示，與培養(yǎng)至對數(shù)生長期的E.coli或Uu共孵育，CRES蛋白可抑制E.coli或Uu的生長，且這種效應具有明顯的時間—劑量依賴性。應用定點突變技術使CRES蛋白第105位或/和第139位的半胱氨酸殘基突變?yōu)榻z氨酸殘基，以分別破壞或同時破壞其兩個二硫鍵，繼而研究二硫鍵突變體的抗E.coli及抗Uu功能。結果顯示，與正常的GST-CRES蛋白類似，二硫鍵突變體同樣具有明顯的抗E
4、.coli和抗Uu功能，說明CRES蛋白的抗微生物功能不依賴于其二硫鍵發(fā)揮作用。進而，我們區(qū)段表達CRES蛋白并檢測其活性發(fā)現(xiàn)，N端的30個氨基酸(N30)完全失去了抗微生物的活性，而N60與CRES全長蛋白相似，均可明顯抑制E.coli和Uu的生長，表明CRES蛋白的抗微生物活性中心可能存在于其N端第31至60個氨基酸之間。最后研究了CRES蛋白對E.coli通透性和大分子物質(DNA、RNA、Protein)合成的影響來探討其抗菌機
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