SDF-1及CXCR4在哮喘小鼠肺組織中的表達(dá)及布地奈德的干預(yù)作用.pdf

1、支氣管哮喘是由多種細(xì)胞,包括炎性細(xì)胞和氣道結(jié)構(gòu)細(xì)胞以及細(xì)胞組分共同參與的氣道慢性炎癥性疾病,以氣道炎癥、氣道重塑及氣道高反應(yīng)性為特點(diǎn)。反復(fù)的氣道炎癥在不斷的損傷與修復(fù)過(guò)程中,逐漸引起了氣道結(jié)構(gòu)的改變,包括上皮細(xì)胞脫落、上皮下纖維化、氣道平滑肌增厚、平滑肌層與上皮層距離縮短、黏液腺化生和杯狀細(xì)胞化生、血管增生及重塑、氣道壁水腫等,被稱為氣道重塑。氣道重塑與哮喘患者的氣道高反應(yīng)性及不完全可逆性氣流受限都有著密切的關(guān)系,其具體發(fā)生機(jī)制尚未完全

2、闡明?；|(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(stromal cellderived factor-1,SDF-1)及CXC趨化因子受體4(CXC chemokine receptor4,CXCR4)屬于趨化因子家族,兩者相互作用通過(guò)趨化炎癥細(xì)胞、促進(jìn)血管生成和血管重塑、調(diào)節(jié)其他細(xì)胞因子的表達(dá)等影響支氣管哮喘的病理生理過(guò)程及氣道重塑的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立小鼠哮喘模型,研究SDF-1及CXCR4在小鼠肺內(nèi)的表達(dá)以及二者在哮喘氣道重塑發(fā)生中的作用,并應(yīng)用布地

3、奈德進(jìn)行干預(yù),以期為哮喘的早期干預(yù)及治療提供理論依據(jù)。
　　 目的
　　 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立小鼠哮喘模型,探討哮喘小鼠發(fā)病過(guò)程中基質(zhì)細(xì)胞衍生因子(SDF-1)及其受體CXCR4在肺內(nèi)表達(dá)的變化,及布地奈德的干預(yù)對(duì)其表達(dá)的影響。
　　 材料和方法：
　　 1動(dòng)物分組和模型制作方法
　　 雄性清潔級(jí)6-8周齡BALB/c小鼠30只,隨機(jī)分為對(duì)照組、哮喘組、干預(yù)組,每組10只。哮喘組小鼠于第1天、第8天和第

4、15天腹腔注射卵清蛋白(ovalbumin,OVA)/氫氧化鋁混合液0.2ml(內(nèi)含OVA20μg,氫氧化鋁1 mg)致敏,從第22天開始用2％OVA生理鹽水霧化吸入激發(fā),隔天一次,每次30分鐘,共激發(fā)7次；干預(yù)組以相同方法致敏和激發(fā),每次OVA霧化激發(fā)30分鐘前用1mg布地奈德混懸液霧化治療；對(duì)照組腹腔注射及霧化吸入均用生理鹽水替代,方法同哮喘組。
　　 2肺組織標(biāo)本處理
　　 各組小鼠于末次霧化結(jié)束后24小時(shí)內(nèi)用戊巴

5、比妥鈉45mg/kg腹腔注射進(jìn)行麻醉,迅速開胸取左肺,置于液氮凍存,留作RT-PCR用,然后經(jīng)右心室插管至肺動(dòng)脈,用生理鹽水快速?zèng)_沈后取右肺中葉,置于4％甲醛溶液固定24小時(shí),酒精梯度脫水,石蠟包埋,做厚度5μm切片,分別做HE染色和免疫組織化學(xué)染色。
　　 3免疫組化及HE染色結(jié)果分析
　　 結(jié)果：分析采用Image Pro Plus6.0圖像分析軟件,對(duì)HE染色圖片測(cè)定相同級(jí)別的完整的支氣管橫斷面的支氣管壁面積(μm

6、2)、氣道上皮黏膜層面積(μm2)、氣道平滑肌面積(μm2),并將其與基底膜周徑(μm)的比值代表氣道壁厚度(μm2/μm)、上皮黏膜層厚度(μm2/μm)、平滑肌層厚度(μm2/μm)。對(duì)于免疫組化圖片測(cè)定陽(yáng)性區(qū)平均光密度值,每張切片選擇至少5個(gè)高倍鏡視野,取其平均值作為該切片的代表值。
　　 4 RT-PCR
　　 將凍存左肺用Trizol法提取總RNA,并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增目的片段CXCR4與β-act

7、in。擴(kuò)增后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,用Band Scan5.0凝膠分析軟件分別測(cè)定CXCR4與β-actin的灰度值,并以CXCR4與β-actin的比值作為該小鼠的代表值。
　　 5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　 應(yīng)用SPSS13.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示。各組樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析,兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn),各因素之間的相關(guān)性采用pearson相關(guān)分析,以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　

8、 結(jié)果：
　　 1病理學(xué)改變
　　 哮喘組小鼠氣道壁增厚,管腔變形狹窄,氣道上皮細(xì)胞脫落,杯狀細(xì)胞化生,黏液分泌增多,平滑肌層明顯增厚,黏膜下及管壁周圍炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯。干預(yù)組上皮細(xì)胞偶有脫落,黏膜相對(duì)完整,氣道壁增厚及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)均明顯輕于哮喘組。對(duì)照組肺組織幾乎無(wú)上述病理改變。
　　 2免疫組化結(jié)果
　　 SDF-1在哮喘組的表達(dá)(0.426±0.052)顯著高于對(duì)照組(0.268±0.037),經(jīng)布

9、地奈德干預(yù)后小鼠肺內(nèi) SDF-1的表達(dá)水平(0.361±0.065)明顯低于哮喘組小鼠,P<0.05。
　　 3 RT-PCR結(jié)果
　　 CXCR4哮喘組的表達(dá)0.829±0.027)顯著高于對(duì)照組(0.607±0.124),經(jīng)布地奈德干預(yù)后小鼠肺內(nèi)CXCR4的表達(dá)水平(0.723±0.094)明顯低于哮喘組小鼠,P<0.05。
　　 4相關(guān)性分析
　　 SDF-1表達(dá)量與氣道壁厚度呈正相關(guān)(γ=0.74