OCT4在膀胱癌中的表達及其意義的研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2 0 0 9 級碩士學(xué)位論文O C T 4 在膀胱癌中的表達及其意義的研究E x p r e s s i o na n d s i g n i f i c a n c eo f O C T 4 p r o t e i ni nb l a d d e r c a n c e r課題來源： 自選課題專 業(yè) 名 稱學(xué)位申請人指 導(dǎo) 教 師答辯委員會主席答辯委員會成員泌尿外科學(xué)趙朋朋劉春曉教授高 新教授毛向明教授鄧春華教授姚友生教

2、授趙 明教授論文評閱人 鄭少波教授姚友生教授2 0 12 年5 月1 日 廣州摘要經(jīng)基本明確，其基因調(diào)節(jié)通路仍欠明確。由于O C T 4 主要表達于胚胎及生殖細胞腫瘤中，多數(shù)研究針對上述腫瘤，并且已經(jīng)證實O C T 4 為人生殖腫瘤干細胞標志物、人干細胞標志物。國內(nèi)外有研究證實膀胱癌組織中有O C T 4 的表達，多數(shù)認為其表達差異性與病理分級、浸潤程度有相關(guān)性，與臨床分期、年齡等無相關(guān)性，但在是否于膀胱癌轉(zhuǎn)移有相關(guān)性上存有異議。同時對

3、于膀胱癌細胞株的研究較為欠缺。本實驗將從膀胱癌腫瘤組織標本及5 株膀胱癌細胞株兩個層面進行研究，通過免疫組化、W e s t e r nB l o t 和反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)( P C R ) 技術(shù)檢測o C T 4在膀胱癌組織及膀胱癌細胞株中的表達。進一步明確O C T 4 與膀胱癌生物學(xué)行為的相關(guān)性，探討O C T 4 能否作為膀胱癌腫瘤標記物。目的：采用蛋白印跡技術(shù)( W e s t e r nB l o t t i n g )

4、、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)技術(shù)( R T - P C R ) 檢測O C T 4 在膀胱尿路上皮癌細胞株R T - 4 ，T c c - S u p ，K K 4 7 ，T 2 4 ，5 6 3 7 及人膀胱上皮永生化細胞株S V - H U C - 1 中的表達，為研究O C T 4 在膀胱癌發(fā)生中的作用及可能機制打下基礎(chǔ)。同時采用免疫組化技術(shù)，檢測轉(zhuǎn)錄因子O C T 4在膀胱癌及膀胱J 下常組織是否表達及其表達水平的差異性，分析其與分化

5、程度、臨床分期、復(fù)發(fā)、預(yù)后等的相關(guān)性，探討其能否可作為膀胱癌早期珍斷的標志物。方法：一：選取5 株不同病理分級的膀胱尿路上皮癌細胞株R T - 4 ( T 2 ，( ；1 )T c c —S u p ( T 4 ， 6 2 ) ，K K 4 7 ( T 3 ， G 2 ) T 2 4 ( T 4 ， G 3 ) 5 6 3 7 ( T 4 ，G 3 )及人膀胱上皮永生化細胞株S V - H U C - 1 作為實驗對象。細胞培養(yǎng)后收集細

6、胞，提取蛋白，用B C A 法進行蛋白定量檢測，用W e s t e r nb l o t 方法檢測蛋白質(zhì)樣品中干細胞標志物O C T 4 的表達情況，使用化學(xué)發(fā)光法，以等量的B - a c t i n 蛋白質(zhì)作對照，分析表達差異性。提取R N A 后使用試劑盒進行R T - P C R ，讀取吸光度，制作溶解曲線，以目的基因與G A P D H 的比值進行定量分析。二：為檢測O C T 4 在膀胱癌中的表達，我們共收集4 6 例完整切