溫度敏感型納米載體的構(gòu)建與評價.pdf

1、目的：考察具有陽離子型和溫度敏感性的泊洛沙姆殼聚糖接枝物納米膠束的理化性質(zhì),并探討影響模型抗原的巨噬細胞與樹突狀細胞攝取的因素,以便為新型疫苗載體的研究提供實驗依據(jù)。
　　 方法：本研究利用1-乙基-3-(3-二甲基丙基)-碳二亞胺(EDC)和N-掘基-丁二酰亞胺(NHS)介導反應,合成泊洛沙姆-殼聚糖接枝物,通過核磁共振圖譜(1H-NMR)和紅外光譜圖(FT-IR)驗證中間體及產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)。采用芘熒光探針法和可見分光光度法測定了

2、接枝物的臨界膠束濃度(CMC)和最低臨界溶液溫度(LCST)。采用直接分散法制備含OVA的聚合物納米膠束,BCA法測定納米膠束的載藥量和包封率,并以粒徑、載藥量和包封率作為指標篩選工藝與處方。探討納米膠束在37℃和4℃條件下的體外釋放行為,并通過MTT法考察泊洛沙姆殼聚糖接枝物的細胞毒性。體外誘導小鼠骨髓中單個核細胞使其分化形成樹突狀細胞,通過熒光顯微鏡和流式細胞儀考察巨噬細胞和樹突狀細胞對納米粒的攝取情況。
　　 結(jié)果：紅外光

3、譜圖和核磁共振分析結(jié)果確證了中間體及泊洛沙姆殼聚糖接枝物的合成,熱分析結(jié)果進一步驗證了泊洛沙姆殼聚糖接枝物的形成。當Poloxamer與CS投藥質(zhì)量之比為0.63:0.025時,所制得的聚合物CMC值為(3.24±0.06)x10-6m01`L-1,LCST在37℃附近。在優(yōu)選的納米膠束制備工藝與處方條件下,所制得載藥納米膠束粒徑為(219.1±2.3)nm,OVA的包封率和載藥量分別為(42.2±5.6)％和(21.4±2.3)％,且

4、重現(xiàn)性良好。載藥納米膠束的Zeta-電位為(11.67±2.25)mV。負載OVA的膠束在37℃條件下的4h累積釋放為30％,但在4℃條件下4 h即可達到釋放完全。MTT結(jié)果表明,聚合物膠束的細胞毒性低。熒光顯微鏡和流式細胞儀的結(jié)果顯示,巨噬細胞和樹突狀細胞對FITC-OVA納米膠束的攝取率明顯高于溶液態(tài)FITC-OVA。
　　 結(jié)論：泊洛沙姆接枝殼聚糖形成的納米膠束具有溫度敏感性和陽離子特征,且細胞毒性低,可顯著提高所負載模型