腦紅蛋白(NGB)作用的分子基礎及其在腦缺氧損傷防護中的意義.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、為了探討腦紅蛋白作用的分子基礎,該研究利用酵母雙雜交系統(tǒng)從人胎腦cDNA文庫中篩選與其有相互作用的蛋白.序列分析表明,酵母雙雜交篩選得到的一個陽性克隆的編碼產(chǎn)物與Na<'+>,K<'+>-ATPaseβ2亞基(NKA1b2)的C端序列一致.NGB的系列缺失體與NKA1b2亞基C端序列的共轉(zhuǎn)化實驗證明N端15個氨基酸是NGB與β2亞基結(jié)合所必需的.隨后采用PCR方法從人胎腦cDNA文庫中擴增獲得NKA1b2全長cDNA.GST-pull

2、down實驗表明,原核表達的NGB與體外轉(zhuǎn)錄翻譯得到的NKA1b2在細胞外有結(jié)合作用.免疫共沉淀實驗證明二者的生理條件下能夠以復合物的形式存在.細胞免疫熒光實驗進一步證明NGB與β2亞基在神經(jīng)元內(nèi)存在共定位.體外實驗表明NGB可以抑制Na<'+>,K<'+>-ATPase的活性,具有顯著的量效關系.缺氧應激條件下NGB表達被上調(diào)1~2倍,NGB與β2亞基的相互作用仍然存在,β2亞基的表達不受缺氧調(diào)控.據(jù)量效關系推算, Na<'+>,K<

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