IgH基因重排在眼附屬器淋巴瘤的診斷價(jià)值的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：眼附屬器淋巴瘤在眼眶惡性腫瘤中發(fā)病率較高，居第三位。眼附屬器淋巴瘤中最常見(jiàn)的為黏膜相關(guān)淋巴瘤，為小細(xì)胞淋巴瘤，其形態(tài)學(xué)改變與反應(yīng)性增生相似，給診斷帶來(lái)困難，從而影響治療方案的選擇和預(yù)后的判斷。近年來(lái)隨著免疫組織化學(xué)和分子生物學(xué)的發(fā)展，鑒別手段大大提高。本組試驗(yàn)采用聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)，對(duì)淋巴瘤標(biāo)本的IgH基因的FRⅡ區(qū)和FRⅢ區(qū)進(jìn)行基因重排檢測(cè)，經(jīng)高分辨率瓊脂糖凝膠電泳分析擴(kuò)增產(chǎn)物在目的范圍內(nèi)的條帶情況，分析該方法在眼眶淋巴瘤診斷中的

2、價(jià)值。我們收集我院病理室保存的已經(jīng)明確診斷的石蠟包埋的淋巴瘤標(biāo)本50例，檢測(cè)其PCR擴(kuò)增產(chǎn)物情況，觀察其陽(yáng)性率，從而推測(cè)其在眼附屬器淋巴瘤的診斷價(jià)值。同時(shí)收集部分淋巴細(xì)胞反應(yīng)性增生標(biāo)本，以同樣的方法進(jìn)行基因重排檢測(cè)，進(jìn)一步判斷PCR技術(shù)在眼附屬器淋巴瘤診斷，鑒別診斷中的價(jià)值。 方法：收集2002年1月-2009年3月本院病理室保存的我院手術(shù)切除或活檢的甲醛固定石蠟包埋的淋巴瘤標(biāo)本50例，及淋巴細(xì)胞反應(yīng)性增生標(biāo)本15例，均除外感染

3、性疾?。ㄈ缂?xì)菌，真菌或結(jié)核感染），Wegener肉芽腫及TAO等。每例標(biāo)本均重新切片，行HE染色，和免疫組織化學(xué)染色（CD20，CD3，CD45Ro）。依據(jù)WHO2001年淋巴瘤分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷及分類(lèi)，對(duì)于診斷困難的病例經(jīng)天津市腫瘤醫(yī)院病理科會(huì)診，進(jìn)一步明確診斷。 PCR檢測(cè)IgH基因重排檢測(cè)采用針對(duì)V區(qū)序列相對(duì)保守的FRⅡ、FR-Ⅲ區(qū)的FR2A、FR3A引物。 DNA提取試劑盒法提取甲醛固定石蠟包埋的淋巴瘤標(biāo)本的DNA

4、，β-actinPCR擴(kuò)增檢測(cè)提取的DNA質(zhì)量，淘汰不合格者。采用半巢式PCR經(jīng)過(guò)兩輪擴(kuò)增得到目的產(chǎn)物。 高分辨率瓊脂糖凝膠電泳，紫外線照射下觀察產(chǎn)物在預(yù)期大小片段間出現(xiàn)條帶情況，判斷標(biāo)本的克隆性。 結(jié)果判斷： 陽(yáng)性：樣本擴(kuò)增產(chǎn)物電泳后，在預(yù)期大小片段間出現(xiàn)1或2條清晰，間斷條帶者。（各PCR產(chǎn)物目的片段大小見(jiàn)表2） 陰性：在預(yù)期大小片段間出現(xiàn)彌漫帶或無(wú)特異帶者。 判斷陽(yáng)性結(jié)果的公認(rèn)原則：（1）帶

5、寬不超過(guò)1mm，邊緣整齊；（2）條帶在期望的堿基大小范圍之內(nèi)；（3）如背景上無(wú)Smear，又無(wú)引物二聚體則表示PCR擴(kuò)增失敗，而非陰性；（4）如果出現(xiàn)期望大小之外的其他條帶，則應(yīng)視為人工假象看待，不能作為判斷依據(jù)。 結(jié)果：淋巴瘤標(biāo)本共50例，免疫組織化學(xué)檢查均為B細(xì)胞性非霍奇金淋巴瘤（B cell non Hodgkin lymphoma，B-NHL），其中36例為結(jié)外邊緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤，黏膜相關(guān)淋巴組織型（MZL-MALT），

6、占72.0％；淋巴漿細(xì)胞性淋巴瘤8例，占16.0％；3例為彌漫性大細(xì)胞性淋巴瘤，占6.0％；濾泡性淋巴瘤2例，占4.0％；漿細(xì)胞瘤1例，占2.0％。其中β-actin檢測(cè)淘汰7個(gè)，標(biāo)本太小未提取DNA者4例，剩39個(gè)納入實(shí)驗(yàn)。淋巴細(xì)胞增生標(biāo)本15個(gè)，β-actin檢測(cè)淘汰3個(gè)，剩12個(gè)納入實(shí)驗(yàn)。 淋巴瘤標(biāo)本FR2檢測(cè)陽(yáng)性率79.49％，F(xiàn)R3檢測(cè)陽(yáng)性率61.54％，兩者聯(lián)合陽(yáng)性率（兩者有一項(xiàng)為陽(yáng)性即判斷為陽(yáng)性）可達(dá)92.31％。

7、淋巴增生標(biāo)本FR2檢測(cè)陽(yáng)性率33.33％，F(xiàn)R3檢測(cè)陽(yáng)性率0.00％，兩者聯(lián)合陽(yáng)性率（兩者有一項(xiàng)為陽(yáng)性即判斷為陽(yáng)性）33.33％。 淋巴瘤標(biāo)本和淋巴增生標(biāo)本的IgH基因重排檢測(cè)，兩者相比，陽(yáng)性率有顯著性差異。（SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，四格表資料卡方檢驗(yàn)的校正公式） 結(jié)論：聯(lián)合應(yīng)用FR2，F(xiàn)R3檢測(cè)IgH基因重排對(duì)眼眶B細(xì)胞淋巴瘤的克隆性判斷準(zhǔn)確且客觀，陽(yáng)性率高。對(duì)常規(guī)方法不能確定病變性質(zhì)的病例，有很高的輔助診斷價(jià)值。但