自體腫瘤特異性CTL對裸鼠乳腺癌模型抑瘤作用的研究.pdf

1、目的：樹突狀細胞(DC)是人體內(nèi)功能最強的抗原遞呈細胞(APC)。在捕獲腫瘤細胞后，DC遷移到淋巴結中將腫瘤抗原提呈給T淋巴細胞，誘導其成為腫瘤特異性細胞毒性T淋巴細胞(CTL)，后者特異性殺傷腫瘤細胞。腫瘤引流淋巴結(TDLN)是位于腫瘤淋巴引流區(qū)的淋巴結，TDLN中含有豐富的淋巴細胞和單核細胞。本實驗采取體外誘導培養(yǎng)乳腺癌患者引流區(qū)淋巴結細胞，經(jīng)負載腫瘤抗原的 DC 激活后，使之成為腫瘤特異性CTL，并回輸同體乳腺癌裸鼠模型中，研究

2、自體腫瘤特異性CTL在裸鼠體內(nèi)對腫瘤細胞的生長抑制和殺傷作用。 方法：手術時無菌摘除乳腺癌引流區(qū)肉眼判斷無轉移淋巴結2～3枚及瘤組織一塊，同時無菌切取另一患者瘤組織一塊，用機械法獲取淋巴細胞懸液，離心，以rhGM-CSF、rhIL-4、rhIL-2和TNF-α誘導培養(yǎng)，定期觀察細胞形態(tài)學變化，收集部分細胞進行流式細胞術(FCM)分析，使之成為DC和腫瘤區(qū)域引流淋巴細胞(TDLNC)，然后用自體乳腺癌凍融抗原刺激DC，并和TDL

3、NC共培養(yǎng)，以誘導產(chǎn)生腫瘤抗原特異性CTL；同時將切取的患者乳腺癌組織剪成約1mm<'3>大小種植于32只3～4周齡BALB/C裸鼠胸墊部皮下建成裸鼠乳腺癌模型，2周后將裸鼠隨機分成共4組，每組8只。每5天注射一次，①特異性CTL 組(每只裸鼠局部注射抗原特異性CTL5×10<'6>/ml 0.2ml)②非特異性CTL組(每只裸鼠局部注射非特異性CTL5×10<'6>/ml 0.2ml)③異體CTL組(種植另一患者乳腺癌組織，每只裸鼠局

4、部注射非自體抗原特異性CTL5×10<'6>/ml 0.2ml)④空白對照組(每只裸鼠局部注射生理鹽水0.2ml)，每5天用游標卡尺測量記錄腫瘤長徑(a)、短徑(b)，按體積(V)=πab<'2>/6計算腫瘤體積，并計算腫瘤生長抑制率，統(tǒng)計分析移植瘤生長抑制情況。30天后處死裸鼠取出瘤塊。將腫瘤組織放入福爾馬林溶液中固定、脫水、石蠟包埋切片。常規(guī)HE染色，鏡下觀察腫瘤細胞形態(tài)：由病理醫(yī)師診斷核實，免疫組化染色，觀察T淋巴細胞和樹突狀細胞

5、浸潤情況。 結論： 1.乳腺癌患者腋下引流淋巴結細胞在rhGM-CSF、rhIL-4和TNF-α的誘導下，可以分化為典型的DC； 2.DC具有較強的抗原提呈功能，可以促進TDLNC增殖、分化為抗原特異性CTL； 3.自體特異性CTL對裸鼠體內(nèi)自體移植瘤有較高的抑制作用，為乳腺癌免疫治療提供了理論依據(jù)； 4.病理證實移植瘤與人乳腺癌相符，且有DC和大量淋巴細胞浸潤； 5.該方法建立乳腺癌裸