應用基因表達譜芯片篩選盆腔器官脫垂相關基因的實驗研究.pdf

1、研究目的： 1.應用基因表達譜芯片，篩選絕經(jīng)后POP患者與正常絕經(jīng)婦女主韌帶組織中差異表達的基因2.分析差異表達基因，探討POP發(fā)生的分子機制 材料和方法： 1.在絕經(jīng)狀態(tài)、年齡、體重指數(shù)、產(chǎn)次等影響POP發(fā)生的重要因素匹配的前提下，選取3例POP與3例無POP對照的子宮主韌帶組織標本。 2.組織標本行HE染色，Masson's三色染色驗證組織來源，并觀察主韌帶組織形態(tài)結構。 3.Trizol法提

2、取總RNA，并對總RNA進行定量、質檢。采用RNA擴增標記法合成生物素標記的cRNA，與Human Genome U133 Plus 2.0芯片雜交。 4.用SAM軟件篩選｜Score(d)｜≥2，F(xiàn)C值大于2或小于0.5的差異表達基因。用MAS2.0軟件對差異表達基因進行基因功能分類注釋(GO)和代謝通路分析(Pathway)。 5.實時熒光定量PCR驗證DKK1，SFRP1，F(xiàn)ZD5，WNT16,COL1A1的差異表

3、達。 實驗結果： 1.標本行HE染色、Masson's三色染色觀察，證實為子宮主韌帶組織。POP組女性子宮主韌帶組織中膠原纖維與平滑肌束失去正常的排列，形態(tài)紊亂，可見膠原纖維斷裂，平滑肌束細碎。 2.提取總RNA經(jīng)定量和電泳檢測，質量滿足芯片雜交要求。雜交后芯片的各項檢測參數(shù)均達到質控要求，子宮主韌帶組織與基因表達譜芯片的雜交模型建立成功。 3.篩選出179個在POP組和對照組之間差異表達的基因。其中包括

4、20個功能未知的基因。107個基因在POP組中表達上調，72個基因在POP組中表達下調。差異基因涉及多種功能蛋白和代謝通路。其中Wnt信號轉導通路變化最顯著。 4.實時熒光定量PCR證實DKK1，SFRP1，F(xiàn)ZD5，WNT16,COL1A1在POP組中表達明顯升高，與芯片結果一致。 結論: 1.POP患者子宮主韌帶組織中膠原纖維與平滑肌束細碎，排列紊亂。POP中編碼Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ型膠原α1鏈蛋白的基因COL1A1、

5、COL3A1、COL5A1的mRNA水平和MMP2的mRNA水平明顯升高，提示POP中膠原合成增加，分解亦增強。說明POP中膠原的合成和分解活躍，可能以分解為主，引起韌帶支持結構功能的改變，導致POP發(fā)病。 2.人類全基因組表達譜芯片是一種有效的高通量篩選POP差異表達基因的研究方法。本實驗以｜Score(d)｜≥2，F(xiàn)C≥2或FC≤0.5為標準篩選出179個在POP組和對照組之間差異表達的基因。其中包括20個功能未知的基因。1