重試子癇前期患者母胎界面中CD56+NK細胞及穿孔素蛋白的表達.pdf

1、目的:子癇前期是妊娠特有的疾病，嚴重危害母兒健康，其發(fā)病機制尚不完全清楚，近年來研究表明，子癇前期的發(fā)生與母胎界面免疫失衡密切相關(guān)，免疫調(diào)控失衡引起滋養(yǎng)細胞受損、胎盤淺著床，從而參與子癇前期的發(fā)病。NK細胞無需特異性抗原刺激即可殺傷靶細胞，是除T細胞和B細胞外的另一類淋巴細胞，在整個妊娠期間，NK細胞對維持機體免疫平衡狀態(tài)發(fā)揮極其重要的作用。穿孔素蛋白是由534個氨基酸殘基組成的糖蛋白，是NK細胞與殺傷性T細胞中的效應(yīng)物質(zhì)，具有溶細胞活

2、性，故又稱為溶細胞的細胞毒介質(zhì)，穿孔素的表達與母胎界面免疫平衡存在密切聯(lián)系。
　　 本實驗通過免疫組化的方法，檢測重度子癇前期(preeclampsia)患者胎盤母體面中CD56+NK細胞及胎盤附著部位蛻膜中穿孔素蛋白的表達，初步探討兩者在子癇前期發(fā)病中的作用。
　　 方法:
　　 一、研究對象
　　 選擇2009年7月至2011年3月于中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院產(chǎn)科住院分娩的重度子癇前期患者30例，診斷和

3、分類標(biāo)準(zhǔn)參照樂杰主編《婦產(chǎn)科學(xué)》第7版，平均年齡(28.46士3.23)歲，平均孕周(36.45士1.22)周，選擇同期與實驗組年齡及孕周等條件相匹配的正常妊娠婦女30例為對照組，平均年齡(28.60士4.20)歲，平均孕周(37.08士1.35)周，各組孕婦均無原發(fā)性高血壓、糖尿病、肝腎疾病等其他合并癥及并發(fā)癥，各組間年齡、孕周無顯著差異(P＞0.05）。
　　 二、標(biāo)本采集
　　 剖宮產(chǎn)術(shù)中胎盤娩出后，于胎盤母體面中

4、央部位取胎盤組織約2cm*2cm*2cm，避開鈣化部位，同時刮取胎盤附著部位蛻膜組織約5克，用生理鹽水漂洗后，甲醛固定。
　　 三、實驗方法
　　 免疫組織化學(xué)染色按鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶(S-P)法行免疫組織化學(xué)染色。切片常規(guī)脫蠟水化，高溫高壓進行抗原修復(fù)，一抗4℃孵育過夜，DAB顯色，蘇木素復(fù)染。用PBS代替一抗作為陰性對照。結(jié)果判定：光鏡下在每張切片中隨機選取5個高倍視野，采用計算機圖象分析系統(tǒng)進行CD56

5、+NK細胞及穿孔素蛋白平均灰度值分析。
　　 四、統(tǒng)計學(xué)分析實驗數(shù)據(jù)均以(x±s)表示，應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件，進行統(tǒng)計學(xué)處理，樣本均數(shù)比較用t檢驗，P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 一、CD56+NK細胞在胎盤母體面中的表達胎盤母體面中CD56+NK細胞平均灰度值在重度子癇前期組為151.51±14.75，正常妊娠組為136.89±15.21，重度子癇前期組胎盤中CD56+NK細胞明顯高