Cyclin G2在乳腺病變中的表達及其對MCF-7細胞的作用.pdf

1、目的：腫瘤的發(fā)生與細胞增殖失控、分化障礙及凋亡受阻密切相關(guān)，近年來與細胞增殖、凋亡有關(guān)的周期蛋白成為研究癌癥發(fā)生的熱點之一。細胞周期蛋白G2(cyclin G2)是新發(fā)現(xiàn)的周期蛋白G家族成員之一，與傳統(tǒng)周期蛋白促進細胞增殖不同，其功能主要是抑制細胞周期的進程，甚至使細胞進入凋亡過程。目前關(guān)于cyclin G2在乳腺病變中的表達及其對乳腺癌MCF-7細胞的作用還未見相關(guān)報道。本實驗旨在研究： (1)cyclin G2在乳腺病變中的表達及意

2、義， (2)探討cyclin G2對乳腺癌MCF-7細胞體外增殖的作用。 材料與方法：采用：(1)免疫組織化學(xué)染色(S-P法)，觀察Cyclin G2在人乳腺不同病變組織中的蛋白表達情況。(2)通過培養(yǎng)腎小管上皮細胞HK-2，獲取總RNA，采用RT-PCR技術(shù)和基因克隆技術(shù)構(gòu)建pDsRed2-Cyclin G2融合基因。(3)以脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染pDsRed2-Cyclin G2融合基因至人乳腺癌細胞系MCF-7細胞中，熒光顯微鏡下觀

3、察其蛋白在MCF-7中的表達和定位；并采用流式細胞術(shù)檢測Cyclin G2對MCF-7細胞的作用。 結(jié)果：(1)Cyclin G2在正常乳腺組織、乳腺增生癥、導(dǎo)管內(nèi)癌(DCIS)以及浸潤性導(dǎo)管癌(IDC)中的陽性表達率分別為90％、86.66％、56％、43.33％，CyclinG2在正常乳腺組織及乳腺增生癥中的陽性表達率與表達強度均無差異(P>0.05)：Cyclin G2在正常乳腺及乳腺增生組織中的陽性表達率均高于在DCIS

4、中的表達(P<0.05)，顯著高于在IDC中的表達．(P<0.01)，表達強度也顯著高于DCIS和IDC中的表達強度(P<0.01)； Cyclin G2在DCIS與IDC組織中的陽性表達率無明顯差異(P>0.05)，但其表達強度顯著高于在IDC中的表達(P<0.01)。CyclinG2在IDC(LN+)、IDC(LN-)的陽性表達率分別為34.29％、56％，在IDC(LN+)組中的陽性表達率低于IDC(LN-)組(P<0.05)，而

5、表達強度無明顯差異(P>0.05)?？偟膩碚fCyclin G2在正常乳腺中有表達，在乳腺增生癥中的陽性表達率及表達強度與正常乳腺組織相當(dāng)，而在DCIS和IDC中的陽性表達率和表達強度逐漸下降。 (2)培養(yǎng)細胞HK-2，采用RT-PCR技術(shù)，獲得了人類Cyclin G2的cDNA(525bp)。 (3)采用基因克隆技術(shù)構(gòu)建了pDsRed2-Cyclin G2融合基因，通過PCR技術(shù)、酶切反應(yīng)，證實其插入的片段與預(yù)知的相符。

6、其融合蛋白在MCF-7細胞中的定位主要表現(xiàn)為彌漫性地分布在細胞核和細胞漿。(4)轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒pDsRed2-Cyclin G2于MCF-7細胞中，于48h后收集細胞，Annexin V-FITC染色和FCM檢測，結(jié)果顯示部分MCF-7細胞發(fā)生凋亡，F(xiàn)CM檢測結(jié)果顯示其細胞凋亡率為54.23％，高于未轉(zhuǎn)染組(0.21％)及轉(zhuǎn)空質(zhì)粒pDsRed2-N1組(27.16％)(p<0.01)。 結(jié)論：(1)人正常乳腺組織中存在Cyclin