激光針灸及灸法的生物物理機理探索.pdf

1、針灸包括針灸理論、腧穴、針灸技術以及相關器具，在形成、應用和發(fā)展的過程中，具有鮮明的中華民族文化與地域特征，是基于中華民族文化和科學傳統(tǒng)產生的寶貴遺產。在20世紀70年代，有研究者開始提出肥大細胞與經絡現象有關系的假說，該假說認為針刺使較敏感的肥大細胞受刺激或損傷，從而釋放出活性物質，這些物質進一步激發(fā)了局部的經絡感傳現象[1]。隨后越來越多的報道發(fā)現穴位處的肥大細胞數量的確較旁開組織要多，而且肥大細胞作為一種免疫細胞，在收到刺激后會釋

2、放組胺，對人體起著重要的調節(jié)作用。隨著現代科學技術的進步，針灸也在不斷地發(fā)展，例如激光針灸就是一個很好的例子。然而其許多治療機理仍然是個迷，大大的限制了針灸方法的傳播和應用。我們實驗室已有的研究結果表明，肥大細胞在激光刺激下會產生脫顆粒釋放組胺現象，然而肥大細胞內部的信號傳遞過程仍然不得而知；灸法的機理研究還很少，而關于灸法熱作用的研究就更是缺乏。基于這些情況，本文利用掃描共聚焦顯微鏡和熒光光譜方法，研究了激光照射以及不同的熱刺激作用對

3、RBL-2H3肥大細胞胞內鈣離子濃度及其脫顆粒釋放組胺的影響，并對作用機制進行了探討，具體結果如下：
　　 首先，為了觀察激光波長對肥大細胞脫顆粒釋放組胺的影響，采用波長、功率、照射時間分別為406nm-0.081mW--25min＼530nm--0.086mW--25min＼632nm-0.423mW--5min三組，在吸收能量在同一數量級的情況下，406nm釋放組胺量最高，632nm其次，530nm最低，與細胞色素C氧化酶的

4、吸收光譜吻合，說明細胞色素C氧化酶就是激光針灸過程中的靶點。細胞色素C氧化酶接受光子后會產生活性氧，改變線粒體的外膜通透性；對細胞內的細胞色素C進行熒光標記，發(fā)現在激光照射后細胞色素C濃度增加；對細胞質pH值進行監(jiān)測，對30個細胞pH值熒光進行統(tǒng)計分析得到結果表明激光刺激后，肥大細胞細胞質確實出現堿性化；根據已有文獻報道，細胞質堿性化將導致細胞膜上的TRPV通道開啟，并且使外鈣內流，鈣離子作為細胞內最重要的第二信使之一，鈣離子濃度升高將

5、導致肥大細胞脫顆粒。Bcl-2可以有效地抑制線粒體膜通透性的改變，當對上述的實驗采用Bcl-2預先處理，發(fā)現激光照射后，肥大細胞質中細胞色素C濃度和pH值沒有變化，細胞的組胺釋放量也沒有增加，說明了在肥大細胞受激光刺激釋放組胺的實驗過程中，信號起始于線粒體內，當對這一信號源進行阻斷，后面的所有現象都不會發(fā)生。因此我們就通過實驗發(fā)現了激光刺激肥大細胞釋放組胺整個細胞內的信號傳遞過程。
　　 其次，在RBL-2H3肥大細胞熱刺激研究

6、中，采用自制加熱樣品池來滿足對細胞加熱同時觀察的條件；用程序控溫儀測量細胞環(huán)境溶液的溫度，以保證溫度測量的正確性。對細胞線性加熱刺激，通過多次的實驗統(tǒng)計分析，發(fā)現采取含鈣離子的HEPES緩沖液作為細胞加熱環(huán)境溶液時，細胞受熱刺激，內部鈣離子在27℃后開始逐漸增加，在每一個TRPV開啟溫度點，都發(fā)現細胞內部的鈣離子濃度迅速的增加；在60℃時，細胞內鈣離子濃度為初始濃度2～3倍；當采用含有釕紅(RR，阻斷TRPV通道試劑)的HEPES緩沖液

7、時，發(fā)現細胞內部鈣離子濃度隨溫度升高緩慢上升，但是在各個TRPV開啟溫度點沒有明顯變化，最高濃度約為初始濃度的1.5倍；而在完全無外界鈣離子的生理鹽水條件下，仍然發(fā)現細胞內部鈣離子濃度隨溫度升高緩慢上升，但是在各個TRPV開啟溫度點沒有明顯變化，最高濃度約為初始濃度的1.5倍，與加RR阻斷劑結果相似，證明細胞內的鈣庫在溫度刺激導致鈣離子濃度升高現象中起著重要的作用，也證明TRPV是細胞膜上主要響應溫度刺激的離子通道。隨后對組胺濃度測試發(fā)

8、現組胺的釋放與溫度呈量效關系。對細胞直接加入65℃的HEPES緩沖液刺激，發(fā)現細胞內部的鈣離子濃度也迅速增加，增幅到達3倍，說明加熱速率并不是導致細胞內部鈣離子濃度升高的主要因素；細胞在65℃左右開始破裂，細胞內鈣離子濃度下降，暗示灸法中最高溫度閾值不需要超過65℃。
　　 因此，激光刺激作用于肥大細胞，通過線粒體啟動細胞內的信號傳遞過程，線粒體膜通透性增強，細胞色素C釋放到細胞質中，細胞質堿性化，導致細胞膜TRPV通道開啟，胞