草蓯蓉乙醇提取物對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞株增殖及凋亡的干預(yù)作用.pdf

1、目的：探討草蓯蓉乙醇提取物對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞株生長抑制及誘導(dǎo)凋亡的影響，為其成為防治腫瘤的中草藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：選用人肝癌SMMC-7721細(xì)胞株進(jìn)行體外培養(yǎng)，用MTT比色法測定不同濃度、不同時(shí)間段草蓯蓉乙醇提取物對(duì)該細(xì)胞的抗增殖作用；應(yīng)用倒置顯微鏡、HE染色光學(xué)顯微鏡、吖啶橙/溴化乙錠(AO/EB)雙染色熒光顯微鏡及透射電鏡技術(shù)觀察藥物作用后的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡率的變化。

2、 結(jié)果：1)MTT實(shí)驗(yàn)表明：草蓯蓉乙醇提取物在0．25～1.0g/L范圍內(nèi)，于6h、12h、24h對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞株均有抑制生長作用，并表現(xiàn)出濃度、時(shí)間依賴性關(guān)系。草蓯蓉乙醇提取物在終濃度為1.0g/L時(shí)，于24h體外最大抑制率達(dá)到97.88％，與對(duì)照組比較具有顯著性差異。2)倒置顯微鏡下，實(shí)驗(yàn)組SMMC-7721細(xì)胞生長緩慢，呈單層生長：細(xì)胞形態(tài)變圓，胞漿內(nèi)可見空泡樣改變；隨著藥物作用時(shí)間的延長腫瘤細(xì)胞貼壁能力逐漸

3、減弱。HE染色光鏡下，實(shí)驗(yàn)組SMMC-7721細(xì)胞體積變小，呈梭形：隨著藥物作用時(shí)間的延長細(xì)胞生長抑制作用更明顯；部分細(xì)胞收縮變圓，胞漿嗜酸性增強(qiáng)，細(xì)胞核固縮成團(tuán)塊兒狀，呈現(xiàn)出典型凋亡形態(tài)學(xué)改變。AO/EB雙染色熒光顯微鏡下，實(shí)驗(yàn)組SMMC-7721細(xì)胞核體積縮小，細(xì)胞核內(nèi)可見到致密濃染的塊狀或顆粒樣的改變，發(fā)出橘黃色熒光；部分細(xì)胞表面有“出泡”現(xiàn)象。透射電子顯微鏡觀察0.5g/L草蓯蓉乙醇提取物處理后的肝癌細(xì)胞表面微絨毛部分脫落或全部

4、消失，部分細(xì)胞表面有指狀突起：細(xì)胞核呈不規(guī)則形，部分細(xì)胞核出現(xiàn)固縮，部分細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)凝聚，呈塊狀分布；細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)空泡狀結(jié)構(gòu)，細(xì)胞器尚完整。3)流式細(xì)胞儀檢測，對(duì)照組細(xì)胞凋亡率僅為0.04％：當(dāng)0.5g/L草蓯蓉乙醇提取物處理12h、18h、24h后細(xì)胞凋亡率分別上升為9.64％、11.65％，0、32.91％，與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，并隨藥物作用時(shí)間的延長呈增高趨勢。細(xì)胞周期分析發(fā)現(xiàn)對(duì)照組G<,0>/G<,1>期、S期百分比分別為

5、49.24％、18.33％：0.5g/L草蓯蓉乙醇提取物處理12h、18h、24h后G<,0>/G<,1>期百分比均升高，S期百分比均下降，藥物組與正常對(duì)照組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，G<,2>/M期百分比無明顯改變，表明藥物作用后SMMC-7721細(xì)胞被阻滯于G<,0>/G<,1>期。 結(jié)論： 1)體外實(shí)驗(yàn)中，草蓯蓉乙醇提取物對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞生長有抑制作用，呈現(xiàn)出量效和時(shí)效關(guān)系。 2)經(jīng)凋亡形態(tài)學(xué)、流式