shRNA介導IGF-IR基因沉默誘導人肺癌A549細胞凋亡的體內(nèi)外研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:評價RNA干擾(RNA mteffernce,RNAi)技術對人肺癌A549細胞系中胰島素樣生長因子I類受體(IGF-IR)表達的阻斷效應,以及IGF-IR基因沉默后細胞凋亡相關基因和腫瘤體內(nèi)外生物學特性的改變. 方法:應用U6啟動子介導DNA模板轉(zhuǎn)錄生成短發(fā)夾樣RNA(shRNA)并轉(zhuǎn)染人肺癌A549細胞株,經(jīng)RT-PCR和Western blot檢測IGF-IR表達的改變;Western blot檢測bCl-2和ca

2、spase-3的表達;進一步分析IGF-IR信號通路中Erk和Akt磷酸化程度;MTT法檢測體外培養(yǎng)細胞的生長抑制率;流式細胞技術和DNA ladder法檢測細胞增殖周期和凋亡易感性變化;荷瘤裸鼠肺癌模型中觀察瘤內(nèi)注射的抑瘤效應及 TUNEL 法檢測瘤內(nèi)細胞凋亡情況. 結果:IGF-IR表達水平明顯下降(抑制率高達89.8﹪),并同步伴隨bcl-2表達減少、ERK和Akt磷酸化受抑、caspaSe-3激活增加;細胞滯留于GO期

3、的比例上升,對酒精誘導的凋亡易感性明顯增加;腫瘤細胞活力明顯下降:直接瘤內(nèi)注射能有效抑制腫瘤生長(腫瘤體積減少50﹪～60﹪)并促進腫瘤細胞凋亡. 結論:運用RNAi技術能有效抑制A549細胞IGF-IR的表達,使細胞增殖能力減弱,凋亡易感性增加,瘤體生長受抑,抑制IGF-IR產(chǎn)生的抗腫瘤作用可能與其下游通路中有絲分裂原轉(zhuǎn)導途徑(ERK)和抗細胞凋亡信號轉(zhuǎn)途徑(蛋白激酶B途徑)HI3Ak/AKt-1的活化受抑有關.shRNA介

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