中國人Gitelman綜合征SLC12A3基因突變及相關功能研究.pdf

1、Gitelman綜合征是由SLC12A3基因失活突變引起的常染色體隱性遺傳病。臨床特征表現為低血鉀低血氯性堿中毒、低血鎂、低尿鈣、正?；蚱偷难獕阂约凹せ畹哪I素-血管緊張素-醛固酮系統。本文對中國人Gitelman綜合征SLC12A3基因突變及相關功能進行了研究。文章分為三個部分： 第一部分，分析了目前國際單中心最大組的41例Gitelman綜合征患者的表型和基因型特點，對其中4例病例進行了氯離子清除試驗，探討了特定基因型和表型

2、之間的關系，同時比較了不同性別之間的Gitelman綜合征患者的表型特點。發(fā)現了15個與Gitelman綜合征相關的突變類型，其中包括9個國內外從未報道過的SLC12A3基因的新突變。共發(fā)現18名攜帶突變型Thr60Met的患者，Thr60Met的突變頻率高達32％，是本組患者中突變頻率最高的突變型。我們沒有觀察到T60M攜帶者和非攜帶者兩組之間臨床表現和生化指標的差異。男性患者發(fā)病年齡早于女性患者，尿鉀排泄分數明顯高于女性患者。大部分

3、男性患者有夜尿增多，提示腎小管濃縮稀釋功能受損；本研究中腎功能損傷的3名患者均為男性，一定程度上說明男性GS患者的腎功能更易受到影響。 第二部分，在篩查目前國內最大組的GS家系的NCC基因突變的基礎上，選取突變型C430G和G439V在爪蟾卵母細胞上進行異源表達，評價其野生型及突變型NCC的功能表達情況。免疫熒光發(fā)現：野生型NCC蛋白主要表達在細胞膜；突變型G439V NCC蛋白在細胞膜和細胞漿都有表達；突變型C430G NCC

4、蛋白主要表達在胞漿。免疫印跡結果顯示野生型和突變型G439V NCC蛋白均有復雜糖基化和高甘露糖糖基化兩條條帶，而突變型C430G NCC蛋白缺失復雜糖基化的條帶。攝取能力方面，突變型Cys430Gly的鈉離子攝取能力明顯降低，僅為對照組的1.2倍；而突變型Gly439Val的鈉離子攝取能力也明顯降低，僅為對照組的1.17倍。我們的研究證實突變型C4306和G439V均為喪失功能性突變。 第三部分，將攜帶突變型T60M，G196

5、V，Y386C，L571P的質粒轉染到哺乳動物細胞系HEK293細胞，對突變型NCC蛋白的表達進行亞細胞定位，評價其野生型及突變型NCC的功能表達情況。野生型NCC蛋白和突變型T60M，Y386C，L571P NCC蛋白在HEK293的細胞膜和胞漿可見表達，與高爾基體標志GM130和內質網的標志物Calnexin均有共定位；突變型G196V NCC蛋白主要表達在細胞漿，與內質網的標志物Calllexin共定位，與高爾基體標志GM130無