六味地黃方及其配伍對血小板功能的影響.pdf

1、血小板(platelet)是血液中運行著的微小顆粒成分之一，在止血、血栓形成、炎癥反應(yīng)、腫瘤生長與轉(zhuǎn)移及器官移植后的排異反應(yīng)中起重要作用。臨床應(yīng)用六味地黃方(LWDHF)治療與預(yù)防的許多疾病中，如腎病、免疫性疾病、高血壓、糖尿病及并發(fā)的血管病變、動脈粥樣硬化、腫瘤等，血小板功能(粘附、聚集與釋放)的異常是其共有的病理表現(xiàn)之一。本文依據(jù)該方的配伍規(guī)律，觀察了全方(熟地：山茱萸：山藥：澤瀉：丹皮：茯苓為8：4：4：3：3：3組成)及其配伍“

2、三補”方(熟地：山茱萸：山藥為8：4：4)、“三瀉”方(澤瀉：丹皮：茯苓為3：3：3)、熟地/澤瀉“藥對”(8：3)、山茱萸/丹皮“藥對”(4：3)及山藥/茯苓“藥對”(4：3)對肺動脈血栓形成模型小鼠致栓后恢復(fù)時間與血小板損失率的影響，及對模型大鼠、正常家兔血小板粘附功能、聚集功能、5-羥色胺(5-HT)的釋放功能及血小板[Ca2]i的影響；并考察該方的配伍關(guān)系。
　　 1.六味地黃方及其配伍對小鼠肺動脈血栓形成的影響：通過復(fù)

3、制小鼠肺動脈血栓栓塞模型，觀察六味地黃方全方及其配伍“三補”方、“三瀉”方、熟地/澤瀉、山茱萸/丹皮及山藥/茯苓灌胃給藥，對小鼠體內(nèi)血栓形成后恢復(fù)時間及血小板損失率的影響。結(jié)果表明，全方27.0g生藥kg-1、“三補”方17.28g生藥-kg-1、“三瀉”方9.72 g生藥·kg-1、熟地/澤瀉11.88 g生藥-kg-1、山茱萸/丹皮7.56g生藥·kg-1均能明顯縮短小鼠肺栓塞后的恢復(fù)時間，降低致栓后血小板損失率；山藥/茯苓在7.5

4、6g生藥·kg-1時，無明顯影響。提示該方具有抗體內(nèi)血栓形成的作用，抗栓作用與降低血小板損失率正相關(guān)。依據(jù)作用的強弱順序為全方>“三補*方>山茱萸/丹皮>熟地/澤瀉>“三瀉”方>山藥/茯苓，提示該方起主要作用的配伍是山茱萸/丹皮、熟地/澤瀉。
　　 2.六味地黃方及其配伍對血小板粘附功能的影響：鑒于本方是治療陰虛證的代表方劑，根據(jù)陰虛可以致血瘀的觀點。以氫化可的松及腎上腺素復(fù)制陰虛血瘀證大鼠模型。全方(13.50 g·kg-1)

5、、“三補”方(8.64 g·kg-1)、“三瀉”方(4.86g·kg-1)、熟地/澤瀉(5.94 g·kg-1)及山茱萸/丹皮(3.78 g·kg-1)灌胃給藥時，均能明顯降低模型大鼠的血小板粘附率，提示該方有抑制血小板的粘附的作用。按其降低血小板粘附率作用的強弱排列順序為：全方>“三補”方>山茱萸/丹皮>熟地/澤瀉>“三瀉”方；該方抑制血小板粘附的作用以山茱萸/丹皮與熟地/澤瀉貢獻較大。
　　 3.六味地黃方及其配伍對血小板聚

6、集功能的影響：通過對正常家兔體外給藥與陰虛血瘀證模型大鼠灌胃給藥對不同誘導(dǎo)劑引起的血小板聚集率考察，結(jié)果表明：全方及其配伍均能不同程度降低血小板活化因子(PAF)、花生四烯酸(AA)、二磷酸腺苷(ADP)誘導(dǎo)的家兔血小板聚集率，并存在明顯的量效關(guān)系；根據(jù)IC50判斷，由PAF、從、ADP誘導(dǎo)的IC50由大至小的排列順序分別為：山藥/茯苓>“三瀉”方>全方>“三補”方>熟地/澤瀉>山茱萸/丹皮(PAF)；山藥/茯苓>“三瀉”方>全方>熟地

7、/澤瀉>“三補”方>山茱萸/丹皮(AA)；山藥/茯苓>“三瀉”方>全方>熟地/澤瀉>“三補”方>山茱萸/丹皮(ADP)。提示在相同劑量時，山藥/茯苓對血小板聚集的抑制作用最弱，山茱萸/丹皮的作用最強。
　　 陰虛血瘀證模型大鼠灌胃給藥，造模方法與給藥劑量如前所述。結(jié)果表明：全方及其配伍均能明顯降低模型大鼠的血小板最大聚集率；按作用的強弱趨勢排序：全方>山茱萸/丹皮>熟地/澤瀉>“三補”方>“三瀉”方。提示該方有抑制血小板聚集的作

8、用，其配伍山茱萸/丹皮、熟地/澤瀉起主要作用。
　　 4.六味地黃方及其配伍對血小板5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)釋放功能的影響：血小板激活后釋放顆粒內(nèi)的活性物質(zhì)，進一步招募與激活血小板。通過定量檢測5-HT含量，觀察六味地黃方及其配伍體外給藥對ADP激發(fā)的家兔血小板5-HT釋放的影響。結(jié)果表明，在終濃度為18.52mg生藥·ml-1時，全方及其配伍均能明顯降低5-HT釋放率。全方及其配伍的血小板

9、5-HT釋放率由低到高的順序為：山茱萸/丹皮<“三補”方<熟地/澤瀉<全方<“三瀉”方<山藥/茯苓。提示該方具有抑制血小板釋放的作用；該方抑制血小板釋放作用的趨勢是山茱萸/丹皮最強，山藥/茯苓最弱。
　　 5.六味地黃方及其配伍對血小板[Ca2+]i的影響：Ca2+是血小板活化的信使物質(zhì)。通過體外給藥(終濃度為9.26 mg生藥·ml-1)，以Fluo-3AM為Ca2+熒光探針，ADP為血小板激活劑，檢測該方及其配伍對家兔血小板