山楂總黃酮提取工藝、提取物活性及指紋圖譜研究.pdf

1、山楂為薔薇科植物，是一種重要的藥食兩用資源，在我國種植栽培面積廣闊，產(chǎn)量可觀?，F(xiàn)代研究證實，山楂具有抗動脈粥樣硬化，降血壓，降血脂，增加冠脈血流量，抗氧化，防癌、抗癌，以及提高機(jī)體免疫力等生理活性，研究表明，這些生理活性與山楂中所含的黃酮、原花青素以及三萜酸等活性成分有關(guān)。但現(xiàn)有研究主要停留在一些簡單的提取工藝及粗提物的加工上，這極大的影響了山楂及其活性成分的有效利用。為此，本研究構(gòu)建了山楂總黃酮的分析方法；將超臨界CO<,2>萃取新技

2、術(shù)應(yīng)用于山楂活性成分的提取中并優(yōu)化了山楂總黃酮提取工藝，對各種提取物抗氧化功能進(jìn)行了比較研究；結(jié)合HPLC-DAD-MS聯(lián)用技術(shù)系統(tǒng)研究了山楂活性成分的指紋圖譜，以期有效控制山楂藥材質(zhì)量。主要研究概述如下： 1．將改進(jìn)后的聚酰胺吸附與NaNO<,2>-AI(NO<,3>)<,3>比色法用于山楂總黃酮測定，減少了雜質(zhì)的干擾，并且優(yōu)化了顯色時間，結(jié)果表明該方法精密度高，重現(xiàn)性好，顯色穩(wěn)定，加樣回收率高，該方法能更準(zhǔn)確的測定山楂總黃酮

3、的含量。 2．采用乙醇回流法提取山楂總黃酮，以測得山楂樣品中總黃酮含量為指標(biāo)，選用正交表L<,9>(3<'4>)對山楂總黃酮提取工藝進(jìn)行研究。試驗結(jié)果表明：最佳提取條件為用70％乙醇，固液比為1:20，在70℃下提取2h，重復(fù)提取2次，此時總黃酮得率為3.97％。 3．研究了超臨界CO<,2>萃取技術(shù)提取山楂總黃酮的最佳工藝。通過考察萃取壓力、萃取溫度和萃取次數(shù)等影響因素，運(yùn)用中心組合試驗設(shè)計和響應(yīng)面分析法分析得到最佳的

4、萃取工藝條件為：萃取壓力36.6Mpa，萃取溫度47.8℃，萃取4次(40mL95％乙醇夾帶劑，萃取2h)，最優(yōu)工藝條件下的總黃酮得率為0.59％。 4．通過研究山楂不同提取物對DPPH自由基和O<,2><'->·自由基的清除作用考察其抗氧化活性。結(jié)果表明，山楂各種不同提取方法獲得的山楂提取物均有抗氧化活性，不同提取物抗氧化活性強(qiáng)弱為：醇提物>超臨界CO<,2>萃取物>水提物，提取物量與抗氧化活性呈正相關(guān)。通過測定山楂提取物乙酸

5、乙酯、正丁醇和萃余物三個萃取部分清除DPPH·自由基的能力，發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯萃取部分清除DPPH·自由基能力和抗氧化活性最強(qiáng)。 5．建立了不同山楂樣品的HPLC指紋圖譜，并采用HPLC-DAD-MS聯(lián)用技術(shù)獲得了指紋圖譜的多維信息，參照現(xiàn)有文獻(xiàn)，對指紋圖譜中的主要色譜峰進(jìn)行了結(jié)構(gòu)歸屬的初步判斷，鑒定了7個共有峰。對色譜指紋圖譜進(jìn)行相似度計算，獲得了令人滿意的結(jié)果，并生成了對照指紋圖譜，該法為山楂樣品的鑒定提供了較全面的信息，有助于提