膜型基質金屬蛋白酶在人惡性造血細胞株和內皮細胞株中的表達及意義.pdf

1、蘇州大學博士學位論文膜型基質金屬蛋白酶在人惡性造血細胞株和內皮細胞株中的表達及意義姓名：蔣菊香申請學位級別：博士專業(yè)：內科血液學指導教師：阮長耿20070401膜型基質金屬蛋白酶在人惡性造血細胞株和內皮細胞株中的表達及意義中文摘要pcDNA31／V5HisTOPOMTlMMP表達載體；載體經酶切、PCR和測序鑒定后通過脂質體介導轉染至HL60瞬時表達，RTPCR，realtimePCR和流式細胞術鑒定轉染效果。利用建立的HL60／MTl

2、MMP細胞為模型，HL60／pcDNA31為對照，用MTT法檢測細胞的增殖，realtimePCR檢測MMP2、Bcl2和Bax的表達，Transwell板檢測細胞侵襲能力，流式細胞術分析細胞周期。結果：成功構建了MTlMMP表達載體，real—timePCR和流式細胞術鑒定MTlMMP能在HL60中獲得高效表達。MTT法結果提示轉染后HL60／MTlMMP細胞的增殖能力顯著高于對照組(P001)，real—timePCR提示轉染后48

3、h轉染組和對照組相比MMP一2、Bcl2和Bax的表達無明顯變化，Transwell板檢測結果顯示轉染后48hHL60／MTlMMP的侵襲能JJ(15424238％)顯著高于對照組(5164O78呦(Po01)，細胞周期分析發(fā)現(xiàn)轉染后24h，HL60／MTlMMPG2期和S期比例(6754357％)高于對照組(5794252％)(P005)，而轉染后48h和72h則兩組細胞細胞周期無明顯差別。結論：過度表達MTlMMP的白血病細胞株體外

4、增殖和侵襲能力增強，而其侵襲能力的增強與MlVlP一2無直接關系，MTlMMP可能不直接參與調節(jié)Bcl2／Bax介導的細胞凋亡。三、siRNA靶向干擾多發(fā)性骨髓瘤細胞株RPMl8226中MT2MMP的表達及對其功能影響的初步研究目的：通過RNA干擾降低RPMl8226中MT2一MMP的表達，探討MT2一MMP對RPMl8226細胞增殖，凋亡，細胞周期和表達血管內皮生長因子及其受體基因的影響。方法：RealtimePCR篩選3對siRNA

5、(siRNAA，siRNAB，siRNAC)24h，48h和72h的干擾效率，流式細胞術鑒定M他MMP蛋白水平的干擾。以有效干擾的siRNA通過脂質體轉染RPMl8226，建立MT2MMP瞬時沉默細胞模型，以無關siRNA轉染RPMl8226組作為對照，MTT法檢測細胞的增殖，realtimePCR檢測Bcl2，Bax及VEGFA，B，C，D，PIGF，VEGFRl和VEGFR2基因的表達，Transwell板檢測細胞侵襲能力，流式細胞