海昆腎喜對阿霉素腎病大鼠內(nèi)皮素-1調(diào)控機(jī)制的研究.pdf

1、近年來，內(nèi)皮素(endothelin，ET)在慢性腎衰竭(Chronic renal failure， CRF)中的作用日益受到國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注，有許多學(xué)者提出血、尿及腎組織中ET水平的高低可以反映CRF病情的嚴(yán)重性，因為CRF患者血、尿及腎組織中ET水平均有不同程度的升高。當(dāng)腎臟受到各種免疫炎癥損害時腎小球系膜細(xì)胞(Glomerular mesangial cells，GMCs)、腎小球上皮細(xì)胞(Glomerular epithe

2、lial eell，GEC)以及腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞(Glomerular vascular endothelial celI，GvEC)產(chǎn)生ET-1增加，同時腎小管上皮細(xì)胞分泌ET-1增加，促使腎功能減退，進(jìn)行性加速腎纖維化。腎纖維化是各種腎臟疾病發(fā)展到CRF的共同途徑，包括腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化。因此，深入研究ET在腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化發(fā)生機(jī)制中的作用具有重要的意義。 “海昆腎喜”是治療慢性，腎衰竭和早期尿毒癥的國家

3、二類中藥新藥，其主要成分是褐藻多糖硫酸酯(Fucoidan，F(xiàn)PS)。有研究顯示，F(xiàn)PS具有多種生物學(xué)功能，如降血壓、降血脂、降血糖及增強(qiáng)免疫力等作用，本文通過整體動物實驗和體外細(xì)胞實驗，從組織、細(xì)胞、蛋白質(zhì)、基因水平進(jìn)行研究，旨在探討該藥防治腎纖維化的作用機(jī)制。 目的： 通過建立阿霉素腎病大鼠模型，從整體動物實驗研究海昆腎喜是否能夠有效的改善腎功能、延緩腎纖維化、進(jìn)而從器官、組織、細(xì)胞、蛋白質(zhì)、基因水平研究海昆腎喜對E

4、T-1的影響，以期闡明該藥防治腎纖維化的作用機(jī)制。 方法： 1．清潔級雄性Wistar大鼠，按體重大小排序，隨機(jī)分組，手術(shù)組大鼠行右側(cè)腎臟切除術(shù)，并腹腔注射阿霉素建立動物模型，各治療組給予相應(yīng)藥物。每周測量大鼠體重，每2周測大鼠24小時尿蛋白。第10周取大鼠血液檢測生化指標(biāo)，同時取大鼠腎臟觀察腎組織病理形態(tài)學(xué)變化并采用腎小球硬化指數(shù)及腎小管-間質(zhì)損傷評分評價各組大鼠腎組織病理改變。 2．采用免疫組織化學(xué)法，檢測大

5、鼠腎組織中ET-1蛋白；原位雜交法，檢測腎組織中ET-1mRNA。 3．通過LPS刺激GMCs，MTT法檢測在12h，24h，48h和60h各不同時相點GMCs的增殖；用RT-PCR法檢測ET-1 mRNA基因的表達(dá)。 4．通過LPS刺激GMCs，用免疫組化檢測GMCs ET-1蛋白的表達(dá)；用western blot檢測ET-1的含量。 結(jié)果： 1．海昆腎喜治療后，大鼠體重明顯升高，24h尿蛋白減少，BUN、Sc

6、r、Cho、TG明顯下降，大鼠腎組織病理改變明顯減輕。 2．海昆腎喜能夠下調(diào)阿霉素腎病大鼠腎組織固有細(xì)胞胞漿中ET-1蛋白及mRNA的表達(dá)，降低腎組織ET-1含量。 3.海昆腎喜能夠抑制LPS刺激GMCs的增殖，各時相點以大劑量抑制效果最好。RT-PCR實驗結(jié)果表明，海昆腎喜可顯著抑制GMCs ET-1 mRNA基因的表達(dá)，并呈劑量依賴關(guān)系。 4．海昆腎喜能夠明顯抑制LPS刺激的GMCs分泌ET-1蛋白，并呈劑量

7、依賴關(guān)系。 結(jié)論： 1、海昆腎喜可以改善阿霉素腎病大鼠的腎功能，減少尿蛋白，減輕腎臟的病理損傷，并且有劑量依賴關(guān)系。 2、海昆腎喜抗腎纖維化的作用機(jī)理：細(xì)胞水平上，海昆腎喜能夠抑制GMCs的增殖，這可能是海昆腎喜防治腎小球硬化的作用機(jī)制之一；蛋白質(zhì)水平上，海昆腎喜能夠下調(diào)腎組織及GMCs胞漿內(nèi)ET-1蛋白的表達(dá)，進(jìn)而減緩腎纖維化的發(fā)生；基因水平上，海昆腎喜能夠通過逆轉(zhuǎn)錄過程抑制ET-1 mRNA基因的表達(dá)，進(jìn)而抑