miR-155在胃癌中的表達(dá)及其對(duì)人胃癌細(xì)胞增殖與凋亡影響的研究.pdf

1、目的:檢測(cè)miRNA-155在胃癌組織中的表達(dá)情況,并分析其與腫瘤大小、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等的關(guān)系。并通過(guò)RNA干擾上調(diào)miR-155表達(dá),觀察miR-155表達(dá)改變對(duì)人胃癌SGC-7901細(xì)胞株增殖、周期、凋亡的影響,探討miR-155在胃癌中的生物學(xué)作用,進(jìn)一步分析其潛在靶基因,為胃癌的靶向基因治療奠定基礎(chǔ)。
　　方法:1、收集胃癌患者標(biāo)本42例,同時(shí)采取癌組織及相應(yīng)的癌旁非腫瘤組織。通過(guò)SYBR GREEN熒光定

2、量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)各組織中miR-155的表達(dá)水平,比較胃癌組織與癌旁組織中miR-155的表達(dá)差異。分析miR-155的表達(dá)與年齡、性別、腫瘤位置、腫瘤大小、浸潤(rùn)程度、分化程度、TNM分期、血管侵襲等病理特征的關(guān)系。
　　2、以脂質(zhì)體(lipofectamineTM2000)為載體將帶熒光標(biāo)記的陰性對(duì)照鏈轉(zhuǎn)染胃癌SGC-7901細(xì)胞并用倒置熒光顯微鏡觀測(cè)從而篩選出最佳轉(zhuǎn)染條件。設(shè)計(jì)制備針對(duì)miR-155的mimics

3、序列,以最佳轉(zhuǎn)染條件轉(zhuǎn)染細(xì)胞后采用qRT-PCR驗(yàn)證干擾效果以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)用。將擾片段miR-155mimics按最佳轉(zhuǎn)染條件對(duì)miR-155低表達(dá)細(xì)胞株SGC-7901進(jìn)行轉(zhuǎn)染干擾,再分別采用CCK8法,流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)mimics干擾miR-155后對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖,凋亡、周期的影響。
　　結(jié)果:1、胃癌腫瘤組織中miR-155表達(dá)量明顯低于癌旁組織,差異有顯著性(P<0.05)。miR-155的表達(dá)與胃癌

4、的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小有關(guān)。miR-155的表達(dá)與腫塊的位置、患者的年齡、性別、病理分級(jí)、血管侵襲、TNM分期等其他臨床病理因素之間未見顯著相關(guān)性。
　　2、經(jīng)實(shí)驗(yàn)摸索,細(xì)胞數(shù)約為每孔1.5×106個(gè)、siRNA濃度約為80pmol/μL, Lipofectamine2000與mimics比例為5ul:5ul(6孔板)時(shí),有較佳的轉(zhuǎn)染效率,繼續(xù)提高siRNA濃度并不能明顯提高轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染后細(xì)胞miR-155的表達(dá)顯著提高(P<0

5、.05)。與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比,miR-155-mimics過(guò)表達(dá)組SGC-7901細(xì)胞的增殖速度顯著降低;轉(zhuǎn)染48小時(shí)后流式細(xì)胞儀檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率顯示,miR-155-mimics過(guò)表達(dá)組凋亡率明顯高于空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果顯示miR-155-mimics過(guò)表達(dá)組與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比較,差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:1、miR-155在胃癌組織中的表達(dá)