組織因子途徑抑制物-2對K562細(xì)胞生長和侵襲能力的影響.pdf

1、[目的]組織因子途徑抑制物-2（TFPI-2）最初被稱為胎盤蛋白5，在調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的降解和重構(gòu)中發(fā)揮重要作用。在此背景下，有人認(rèn)為TFPI-2合成的減少與許多病理生理過程，如炎癥，血管形成，動脈粥樣硬化，視網(wǎng)膜變性和腫瘤的生長/轉(zhuǎn)移相關(guān)。研究旨在觀察TFPI-2對白血病細(xì)胞株K562細(xì)胞的生長和侵襲轉(zhuǎn)移的影響。 [方法] 1.應(yīng)用脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移技術(shù)將人TFPI-2基因真核表達(dá)載體單純的pcDNA3.0及pcDNA

2、3.0-TFPI-2導(dǎo)入人白血病細(xì)胞株K562中，采用G418篩選帶有表達(dá)載體的細(xì)胞，最后將細(xì)胞分成K562，K562-V（空質(zhì)粒組），K562-T組（帶TFPI-2基因組）進(jìn)行分析。 2.分別通過實時定量PCR法和蛋白印跡技術(shù)（Western blot）檢測3組細(xì)胞TFPI-2的mRNA和蛋白的表達(dá)。 3.將3組細(xì)胞稀釋到一定的密度2×103/孔于24孔板中培養(yǎng)，24小時后計數(shù)每組3孔的細(xì)胞數(shù)，取3孔平均數(shù)，連續(xù)7天，

3、制作細(xì)胞生長曲線圖，并計算每天增長速度和平均增長速度。 4.平板克隆試驗：將每組細(xì)胞稀釋到40，80，120個/孔，放在用纖連蛋白包被的6孔板中，10天后停止培養(yǎng)，固定，染色后顯微鏡下計算克隆率。 5.Transwell實驗：將3組細(xì)胞稀釋到一定密度，通過Transwell體外侵襲轉(zhuǎn)移模型，以遷徙到膜上的每5個高倍鏡視野中的平均細(xì)胞數(shù)作為評價3組細(xì)胞遷徙和侵襲能力強(qiáng)弱的指標(biāo)。 [結(jié)果] 1.熒光定量結(jié)果：

4、3組細(xì)胞的TFPI-2的分別為1.04±0.65，1.44±2.27，61.85±49.52，使用spss13.0的兩樣本t檢驗，發(fā)現(xiàn)K562-T組TFPI-2的mRNA含量明顯高于其余2組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 2.Western Blot結(jié)果：K562-T組有TFPI-2蛋白的表達(dá)，而其余2組未見相應(yīng)蛋白的表達(dá)。 3.從制作的生長曲線看，K562-T組的細(xì)胞生長曲線較其余2組平坦，3組的每天平均生長速度分別為0.954

5、4，0.9007，0.6687。 4.平板克隆實驗：計算3組細(xì)胞的克隆率，K562-T的克隆率低于其余2組，使用spss13.0秩和檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 5侵襲實驗：3組細(xì)胞穿透聚碳酸酯膜的細(xì)胞數(shù)分別為33.67±4.51，28.67±3.51，16.33±4.51，K562-T組的穿透個數(shù)少于其余2組，使用spss13.0的兩樣本t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 [結(jié)論]TFPI-2的表達(dá)能使K562細(xì)胞生長速度