大豆異黃酮及其糖苷的高效液相色譜分析方法與應用研究.pdf

1、大豆含有多種生物活性成分，其中大豆異黃酮是一種植物雌激素，具有預防癌癥、減輕或避免婦女更年期綜合癥、預防骨質(zhì)疏松癥、抗氧化和防護心血管等藥理作用，因而受到廣泛關注。已有大量應用HPLC方法測定大豆異黃酮的報道。但報道的HPLC分析方法中大多只能測定其中幾種異黃酮，一些能測定12種大豆異黃酮的HPLC分析方法則需要較長的分離時間。因此，有必要建立一種能快速準確測定12種大豆異黃酮的HPLC分析方法。 本研究建立了一種快速測定12種

2、大豆異黃酮的HPLC分析方法，并應用該方法分別對休眠和萌發(fā)大豆的胚軸和子葉中的異黃酮含量進行了全面分析，對休眠大豆中異黃酮的組成和分布規(guī)律以及在大豆萌發(fā)過程中胚軸和子葉中異黃酮的變化規(guī)律進行了深入研究；并對經(jīng)加熱處理過的大豆胚軸和子葉中異黃酮的變化規(guī)律進行了分析研究；此外還對大豆胚軸和子葉提取液中異黃酮糖苷的水解反應過程進行了研究。 分析結(jié)果顯示，大豆中異黃酮主要以丙二酰葡萄糖苷存在，其次是葡萄糖苷，苷元含量最低，在休眠大豆中未

3、檢出乙酰葡萄糖苷。研究結(jié)果表明，大豆胚軸和子葉中所含的異黃酮在組成和含量上有顯著差別。在休眠大豆的胚軸中，大豆黃素系列異黃酮含量最高，黃豆黃素系列異黃酮含量次之，染料木黃酮系列異黃酮含量最低；而在休眠大豆或大豆的子葉中，染料木黃酮系列異黃酮含量最高，大豆黃素系列異黃酮含量次之。由于黃豆黃素系列異黃酮只存在于胚軸中，在子葉中未檢出黃豆黃素及其糖苷，因而大豆中黃豆黃素系列異黃酮含量較低。 研究發(fā)現(xiàn)，大豆萌發(fā)開始后，以葡萄糖苷形式存在

4、的異黃酮含量顯著降低，而丙二酰葡萄糖苷和苷元的比例明顯升高。胚軸在整個萌發(fā)過程中，總異黃酮、大豆黃素系列異黃酮和染料木黃酮系列異黃酮的含量持續(xù)增加，黃豆黃素系列異黃酮的含量不斷減少。子葉萌發(fā)開始后，總異黃酮、大豆黃素系列異黃酮和染料木黃酮系列異黃酮的含量不斷上升，并在萌發(fā)60 h后，含量達到最高，此后含量不斷下降。大豆萌發(fā)開始后，總異黃酮和染料木黃酮系列異黃酮的含量不斷上升，并在萌發(fā)72 h后，含量達到最高，此后含量不斷下降：而大豆在整

5、個萌發(fā)過程中，大豆黃素系列異黃酮含量持續(xù)增加，黃豆黃素系列異黃酮的含量不斷減少。值得一提的是，在某種情況下，隨著萌發(fā)的進行，丙二酰葡萄糖苷含量呈現(xiàn)晝高夜低，而苷元含量呈現(xiàn)夜高晝低的生理節(jié)律現(xiàn)象。本研究未能確認導致在萌發(fā)過程中大豆異黃酮的組成及含量呈現(xiàn)晝夜節(jié)律變化的原因，有待進一步深入研究。 在加熱處理大豆的過程中，丙二酰葡萄糖苷分解生成乙酰葡萄糖苷和葡萄糖苷。本研究未從所用大豆中檢出乙酰葡萄糖苷，表明大豆自身不合成乙酰葡萄糖苷，

6、其來源于丙二酰葡萄糖苷的熱降解。若大豆在干燥過程中經(jīng)過熱處理，大豆中的丙二酰葡萄糖苷就有可能通過熱降解產(chǎn)生乙酰葡萄糖苷。 大豆異黃酮提取液中的丙二酰葡萄糖苷在堿水解過程中可水解生成相應的葡萄糖苷。在胚軸提取液中的丙二酰大豆苷的水解速度遠高于子葉提取液中的水解速度。生成的葡萄糖苷在堿性條件下是穩(wěn)定的，而提取液中的染料木黃酮在堿性條件下不穩(wěn)定，會發(fā)生降解；而在酸水解過程中，葡萄糖苷可全部水解生成相應的苷元，生成的苷元在酸性條件下是穩(wěn)