抗HER-2抗體對人卵巢癌血管生成的影響.pdf

1、背景和目的：原癌基因HER-2屬于表皮生長因子受體家族成員，在20％～30％的卵巢癌中過表達(dá)，參與了卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展。研究顯示HER-2過表達(dá)與腫瘤組織內(nèi)微血管密度明顯相關(guān)，HER-2 激活后可通過多種信號通路來調(diào)控血管生成。為此，本課題擬在觀察HER-2、VEGF及微血管密度（microvessel density，MVD）在人卵巢腫瘤組織中的相關(guān)性的基礎(chǔ)上，研究抗HER-2工程抗體ChA21聯(lián)合Herceptin對HER-2過表達(dá)

2、人卵巢癌細(xì)胞SKOV3血管生成的影響。
　　 方法：
　　 1）收集49例人卵巢漿液性上皮腫瘤組織，其中良性17例，交界性7例，惡性25例，利用免疫組化法檢測上述病例中HER-2、VEGF的表達(dá)情況及MVD值，并分析其相關(guān)性；
　　 2）建立人卵巢癌SKOV3裸小鼠移植瘤模型，隨機(jī)分成陰性對照組、ChA21組（30mg/kg）、Herceptin組（20mg/kg）、ChA21+Herceptin聯(lián)合用藥組(30

3、mg/kg+20mg/kg)，每周兩次尾靜脈注射給藥，連續(xù)用藥3周后，處死全部荷瘤裸鼠，計算抑瘤率，應(yīng)用免疫組化法檢測移植瘤組織中VEGF表達(dá)的情況及MVD值；
　　 3）抗HER-2工程抗體ChA21（5mg.L-1）聯(lián)合Herceptin（5mg.L-1）作用于HER-2過表達(dá)人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3，應(yīng)用MTS法檢測細(xì)胞生長抑制率，ELISA法檢測SKOV3上清液中VEGF分泌情況，Transwell小室檢測SKOV3侵襲

4、力變化，Western blotting檢測VEGF、Akt/pAkt蛋白的變化，同時應(yīng)用MTS、Transwell方法檢測兩種抗體聯(lián)合作用對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）增殖和遷移的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1）HER-2的過表達(dá)率、VEGF陽性率以及MVD值在卵巢漿液性囊腺癌及漿液性交界性腫瘤中明顯高于漿液性囊腺瘤（P<0.01）；HER-2、VEGF在卵巢漿液性囊腺癌中的表達(dá)與MVD值呈顯著正相關(guān)（P<0.01

5、）；HER-2、VEGF在卵巢漿液性囊腺癌中的表達(dá)以及MVD值與腫塊大小、腹腔轉(zhuǎn)移情況呈顯著正相關(guān)（P<0.05），與患者年齡、TNM分期無明顯相關(guān)性（P＞0.05）；
　　 2）ChA21聯(lián)合Herceptin連續(xù)用藥3周后，可顯著抑制SKOV3裸小鼠移植瘤的生長，其抑瘤率顯著高于ChA21或Herceptin單藥組；聯(lián)合用藥組移植瘤組織中VEGF的表達(dá)以及MVD值顯著低于陰性對照組、ChA21或Herceptin單藥組（P<

6、0.01）。3）體外培養(yǎng)條件下，ChA21聯(lián)合Herceptin作用48h，可顯著抑制SKOV3的生長和侵襲力；ChA21聯(lián)合Herceptin作用12h，SKOV3上清液中VEGF分泌量也顯著低于ChA21或Herceptin單藥組；Western blotting顯示ChA21聯(lián)合Herceptin作用于SKOV3細(xì)胞48 h后，可顯著降低VEGF、pAkt蛋白的表達(dá)；MTS、Transwell方法檢測兩種抗體聯(lián)合作用對人臍靜脈內(nèi)皮