雙黃連藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究.pdf

1、目的：闡述中藥復(fù)方雙黃連解熱、抗炎的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。 方法：雙黃連方中黃芩的提取提純方法較成熟，其提取物中黃芩苷的含量大于90％，故不對黃芩苷的提取工藝進行研究。對雙黃連方中的金銀花和連翹的提取溶劑，提取方法，提取時間進行研究，設(shè)計正交試驗，篩選出最佳的提取工藝。分別采用含水乙醇和水作為金銀花和連翹的提取溶劑，各設(shè)計正交試驗，以金銀花中的綠原酸和連翹中的連翹苷作為考察指標，將兩正交試驗篩選出的最佳工藝進行比較，含水乙醇提取液中所含

2、的綠原酸、連翹苷等成分的提取轉(zhuǎn)移率均明顯高于用傳統(tǒng)工藝的水煎煮提取。在前期金銀花、連翹乙醇提取最佳工藝確定的基礎(chǔ)上，采用AB-8型大孔吸附樹脂對雙黃連乙醇提取物凈化，從樹脂徑高比、吸附濃度、吸附流速、洗脫劑濃度等方面對大孔吸附樹脂純化工藝條件進行優(yōu)化，以總酚、總黃酮的含量為考察指標，篩選最佳的純化工藝。在金銀花、連翹乙醇提取物加入處方量黃芩提取物抗炎解熱療效確切的基礎(chǔ)上，以干酵母致大鼠發(fā)熱為雙黃連有效部位解熱模型，腹腔注射醋酸致小鼠腹腔

3、毛細血管通透性增高為雙黃連有效部位抗炎模型，比較大孔吸附樹脂不同水-乙醇梯度洗脫部位提取物的抗炎、解熱作用，篩選出雙黃連抗炎、解熱的有效部位。乙醇提取物通過大孔吸附樹脂，用不同濃度的乙醇洗脫得到4個洗脫部位。比較4個洗脫部位加入處方量黃芩提取物后的抗炎、解熱作用。采用高效液相色譜法建立了主要化學(xué)成分綠原酸、連翹苷、黃芩苷的含量測定方法，并進行了系統(tǒng)適用性試驗(線形、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、回收率及空白試驗等)，對自制的3批樣品進行了含量

4、測定。采用高效液相色譜法建立了雙黃連有效部位及其原藥材在同一波長下的HPLC指紋圖譜，作為控制其質(zhì)量的定性指標。通過對十批樣品的色譜檢測和圖譜分析，建立了雙黃連有效部位的指紋圖譜，所得圖譜清晰、分離度穩(wěn)定性良好，可用于雙黃連有效部位質(zhì)量控制。以峰面積較大、分離度好、保留時間適中的、峰穩(wěn)定的黃芩苷色譜峰為參照峰，以其保留時間和峰面積作為1，分別計算其它各共有指紋峰的相對保留時間和相對峰面積，得到雙黃連有效部位指紋圖譜的相關(guān)技術(shù)參數(shù)，并在此

5、基礎(chǔ)上進行了雙黃連有效部位與各原藥材的成分相關(guān)性研究，在260nm檢測波長下找出與原藥材保留時間及其紫外吸收光譜一致的色譜峰，闡明了有效部位中主要指紋峰的藥材來源。并用添加對照品的方法對共有指紋峰進行了化學(xué)成分的歸屬和確定。 結(jié)果：雙黃連中金銀花、連翹的最佳提取工藝為加10倍量80％乙醇，溫浸30分鐘，回流提取2次，每次1小時，濾過，合并乙醇提取液，減壓回收乙醇至無醇味，并繼續(xù)濃縮至稠膏。最佳純化工藝為金銀花、連翹乙醇提取液減壓

6、回收溶劑至無醇味，加蒸餾水稀釋成1.5g·ml-1(生藥量)，樹脂柱的徑高比為1：10，最大的吸附量與樹脂體積比為1：3．3，水洗脫體積為3倍樹脂體積，洗脫劑為70％乙醇，用量為4倍樹脂體積。雙黃連的有效部位為3、4號部位，與原全方雙黃連提取物相比的藥效無明顯差異。結(jié)合第二部分對總成分的考察，確定70％乙醇洗脫部位為雙黃連解熱、抗炎的有效部位。并對有效部位中的指標性成分進行了定量分析。建立了該有效部位的高效液相指紋圖譜，在260nm檢測

7、波長下，有29個峰為主要共有峰，確定其為共有峰，各共有指紋峰的平均相對保留時間的RSD為0.11％～0.69％，相對峰面積比值的RSD為1.05％～2.60％，可見對于不同批次的供試品而言，各共有指紋峰的相對保留時間及峰面積的比值相差不大，重現(xiàn)性良好。通過添加對照品的方式確認出5個有效成分，分別為：5號峰(綠原酸)，6號峰(咖啡酸)，14號峰(蘆丁)，19號峰(連翹苷)，23號峰(黃芩苷)。 結(jié)論：本課題較好的闡述了復(fù)方雙黃連抗