轉(zhuǎn)運體miRSNP與結直腸癌發(fā)生發(fā)展及化療反應相關性研究.pdf

1、第一部分轉(zhuǎn)運體基因3’-UTR上的SNP與人結直腸癌發(fā)生發(fā)展及化療反應相關性研究
　　【目的】探討轉(zhuǎn)運體基因3’-UTR上的SNP與人結直腸癌發(fā)生、臨床病理參數(shù)、化療副反應及化療療效的相關性。
　　【方法】首先，篩選轉(zhuǎn)運體基因上的 SNP位點，并設計等位基因特異性引物；其次，收集175例結直腸癌患者和300例健康人的外周血，從中提取DNA；然后，采用等位基因特異性擴增法測定轉(zhuǎn)運體基因上的 SNP基因型；最后，用統(tǒng)計軟件分析S

2、NP基因型與人結直腸發(fā)生、臨床病理參數(shù)及化療反應的相關性。
　　【結果】（1）研究了6個位于轉(zhuǎn)運體基因3’-UTR上的SNP位點基因型與結直腸癌發(fā)生的相關性，結果發(fā)現(xiàn)，rs3742106、rs63282661和rs1059751的等位基因及基因型分布頻率在結直腸癌患者和健康人群中存在顯著差異(P＜0.05)。其中，rs3742106與結直腸癌的相關性最為顯著；與 GG基因型相比，TT基因型（OR=0.434,95%CI=0.215

3、-0.875）、TG基因型（OR=0.589,95% CI=0.387-0.895）和T等位基因攜帶者（OR=0.614,95% CI=0.451-0.836）患結直腸癌的風險均更低。此外，病例組中T等位基因頻率也顯著低于對照組中T等位基因頻率（24.84%vs34.98%;P=0.002），提示T等位基因可能對結直腸癌的發(fā)生起到保護作用。rs562、rs3177514和rs2458225的等位基因及基因型分布頻率在結直腸癌和正常人群中

4、的差異無統(tǒng)計學意義。（2）臨床病理參數(shù)相關性分析結果表明，rs1059751位點基因型與患者腫瘤浸潤深度相關，其CT基因型在T3+T4患者中的頻率顯著低于TT型，提示CT基因型可能不利于腫瘤浸潤，起到保護機體的作用。rs2458225的基因型與腫瘤大小相關，其 CT基因型患者的腫瘤似乎比TT型患者的小，也可能起到保護作用。（3）與5-FU化療反應相關性分析結果表明，除了rs3742106的基因型與化療副反應的發(fā)生幾近相關（P=0.069

5、）之外，其余SNP位點的基因型與結直腸癌化療副反應及療效之間均無明顯相關性。
　　【結論】ABCC4基因3’-UTR上的SNP位點rs3742106與人結直腸癌的發(fā)生顯著相關，其T等位基因可能對結直腸癌發(fā)生起到保護作用。
　　第二部分 ABCC4基因3’-UTR上的SNP rs3742106對miRNA調(diào)控作用的影響
　　【目的】研究ABCC4基因3’-UTR上的SNP位點 rs3742106對miRNA調(diào)控作用的影響

6、。
　　【方法】首先，構建ABCC4基因上miR-105、miR-3148和miR-3190-5p作用靶點序列的兩種基因型（GG和TT）熒光素酶表達載體；其次，將構建好的載體和miRNA共同轉(zhuǎn)染CHO細胞，并用雙熒光素酶報告系統(tǒng)測定基因活性；最后，運用統(tǒng)計學軟件分析SNP位點rs3742106對miRNA調(diào)控作用的影響。
　　【結果】（1）與對照組熒光素酶活性相比，miR-105、miR-3148和miR-3190-5p分別

7、能顯著抑制TT、GG和GG型重組熒光素酶的活性（P<0.05）。（2）比較兩種不同基因型重組熒光素酶的活性發(fā)現(xiàn)，miR-3148（P=0.022）和miR-3190-5p（P=0.024）組存在顯著差異，而miR-105的差異無統(tǒng)計學意義（P=0.23），提示SNP位點rs3742106對miR-3148和miR-3190-5p抑制ABCC4基因表達的作用存在影響。
　　【結論】 SNP位點rs3742106通過影響miR-314