基于STAT3信號研究健脾和胃法對人食管癌EC-9706細胞生存的影響.pdf

1、目的：
　　通過研究六君子湯和啟膈散乙酸乙酯部位提取物對人食管癌EC-9706細胞增殖、凋亡、分泌細胞因子 IL-6、TGF-β1、VEGF及STAT3信號的調控作用，初步探討健脾和胃法對腫瘤細胞生存的作用機制，為臨床應用提供實驗依據。
　　方法：
　　70％乙醇提取六君子湯和啟膈散后，經乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到70%乙醇部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位，經過不同藥物濃度（125，250，500，1000μg/

2、ml）作用于EC-9706細胞的篩選，選取乙酸乙酯部位作為有效部位；六君子湯乙酸乙酯部位(6.25～200μg/ml)、啟膈散乙酸乙酯部位（12.5～200μg/ml）培養(yǎng) EC-9706細胞48h后，MTT法檢測對細胞增殖的抑制情況，用流式細胞儀檢測細胞凋亡情況；用激光共聚焦顯微鏡觀察藥物作用后細胞形態(tài)變化及凋亡小體；ELISA法檢測細胞上清中白細胞介素-6（IL-6）、腫瘤轉化生長因子因子-β1（TGF-β1）、血管內皮生長因子（V

3、EGF）的分泌情況；采用Western Blot法檢測細胞中STAT3和p-STAT3的蛋白表達水平。
　　結果：
　　1.六君子湯和啟膈散乙酸乙酯部位對 EC-9706細胞的抑制效果均明顯優(yōu)于70%乙醇部位、正丁醇部位和水部位。
　　2.六君子湯和啟膈散乙酸乙酯部位分別作用于 EC-9706細胞48 h，OD值均比對照組有不同程度的降低，且抑制率隨濃度增高而增高，呈劑量-效應關系（P＜0.05）。
　　3.流式

4、細胞術測定細胞凋亡結果顯示，六君子湯和啟膈散乙酸乙酯部位提取物的低、中、高三個濃度組，凋亡率明顯增加，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。
　　4. ELISA法檢測結果顯示，在對照組細胞上清中三種因子的含量最多，六君子湯和啟膈散乙酸乙酯部位的低中兩個濃度均對細胞分泌因子有一定的抑制作用。六君子湯低中濃度組均降低了細胞上清IL-6、TGF-β1、VEGF含量（P＜0.01）。啟膈散低中濃度組降低了IL-6、TGF-β1含量（P＜0

5、.01）；與對照組比較，啟膈散低濃度組對VEGF的含量有輕微抑制作用，但無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；中濃度組明顯降低了VEGF的含量（P＜0.01）。同水平濃度下，啟膈散中、低濃度組對IL-6水平的抑制效果優(yōu)于六君子湯（P＜0.01）；對VEGF水平的抑制效果，啟膈散中濃度組優(yōu)于六君子湯（P＜0.01），而兩方低濃度組無顯著差異（P＞0.05）；兩方對TGF-β1的水平影響無明顯差異（P＞0.05）。
　　5. Western

6、Blot結果顯示，六君子湯和啟膈散乙酸乙酯部位低、中濃度組作用EC-9706細胞48h后，均下調了STAT3和p-STAT3蛋白的表達。
　　結論:
　　1.六君子湯和啟膈散乙酸乙酯部位提取物能抑制 EC-9706細胞的體外增殖，其抑制作用呈劑量-效應關系。
　　2.六君子湯和啟膈散乙酸乙酯部位能降低EC-9706細胞上清中IL-6、TGF-β1、VEGF水平。
　　3.六君子湯和啟膈散乙酸乙酯部位提取物抑制EC