MAPK途徑在煙粉虱-雙生病毒互作中的作用.pdf

1、煙粉虱Bemisia tacbaci(Gennadius)是傳播雙生病毒科（Geminiviridae）菜豆金黃花葉病毒屬（Begom ovirus）的唯一媒介昆蟲(chóng)，在病毒傳播過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用。隨著煙粉虱和雙生病毒在世界范圍內(nèi)的危害日益加重，對(duì)兩者之間的互作機(jī)制研究也越來(lái)越重要。本實(shí)驗(yàn)室已有研究表明，雙生病毒在侵染煙粉虱后誘導(dǎo)了蟲(chóng)體內(nèi)的自噬免疫反應(yīng)，而自噬反應(yīng)途徑的激活又反過(guò)來(lái)抑制了病毒在煙粉虱體內(nèi)的積累。昆蟲(chóng)主要依靠非特異的先

2、天性免疫來(lái)抵抗病原菌的侵染，而煙粉虱中相關(guān)免疫機(jī)制還不清楚，明確煙粉虱的免疫機(jī)制能夠?yàn)檫M(jìn)一步探究煙粉虱傳播雙生病毒的特異性機(jī)理提供參考。
　　本論文通過(guò)研究TYLCV、TYLCCNV、PaLCuCNV三種雙生病毒侵染對(duì)MEAM1煙粉虱中絲裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase，MAPK)途徑的影響，以明確MAPK途徑在煙粉虱抵御病毒侵染過(guò)程中的作用;通過(guò)c-Jun氨基末端激酶(c-Jun

3、N-terminalkinase，JNK)特異性誘導(dǎo)劑和抑制劑處理MEAM1煙粉虱，分析病毒在煙粉虱體內(nèi)的積累情況以及煙粉虱傳播病毒的效率，驗(yàn)證MEAM1煙粉虱中MAPK家族成員JNK信號(hào)通路在TYLCV與寄主昆蟲(chóng)互作過(guò)程中所起的作用;采用RNAi手段阻斷JNK信號(hào)通路，來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證JNK信號(hào)通路的作用。本研究還通過(guò)JNK抑制劑和誘導(dǎo)劑處理MEAM1煙粉虱，探究了煙粉虱中JNK信號(hào)通路與細(xì)胞凋亡的關(guān)系，為煙粉虱中細(xì)胞凋亡免疫途徑的研究提

4、供了方向。研究結(jié)果如下:
　　(1)TYLCV侵染對(duì)MEAM1煙粉虱JNK信號(hào)通路的影響
　　TYLCV侵染煙粉虱后，Western Blot檢測(cè)結(jié)果表明JNK及JNK下游的轉(zhuǎn)錄因子c-Jun磷酸化水平都顯著提升;免疫熒光結(jié)果顯示c-Jun還呈現(xiàn)明顯的進(jìn)入細(xì)胞核的現(xiàn)象。說(shuō)明MEAM1煙粉虱受到TYLCV感染后，JNK信號(hào)通路被激活，以抵御病毒的侵染。
　　(2)JNK信號(hào)通路對(duì)TYLCV在MEAM1煙粉虱體內(nèi)積累的影響

5、
　　JNK抑制劑處理MEAM1煙粉虱后，RT-PCR、Western Blot檢測(cè)結(jié)果都顯示TYLCV-DNA和TYLCV-CP在煙粉虱體內(nèi)的積累量顯著減少。傳毒實(shí)驗(yàn)也表明，JNK被誘導(dǎo)后傳毒效率顯著提高，而抑制JNK后傳毒效率下降很顯著。RNAi實(shí)驗(yàn)也證明，在阻斷JNK信號(hào)通路后，TYLCV在MEAM1煙粉虱體內(nèi)的積累量也顯著減少。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果都說(shuō)明，JNK信號(hào)通路的激活能夠促進(jìn)TYLCV在MEAM1煙粉虱體內(nèi)的積累及傳毒效率

6、的提高。
　　(3)TYLCCNV、PaLCuCNV對(duì)MEAM1煙粉虱MAPK途徑的影響
　　Western Blot結(jié)果顯示MEAM1煙粉虱在被TYLCCNV和PaLCuCNV感染后，MEAM1煙粉虱中JNK的磷酸化水平也明顯提升，與TYLCV侵染后的結(jié)果相似。結(jié)果表明TYLCVNV和PaLCuCNV侵染MEAM1煙粉虱后也同樣能夠激活其MAPK途徑。
　　(4)MEAM1煙粉虱體內(nèi)JNK信號(hào)通路與細(xì)胞凋亡的關(guān)系