PCR和LAMP檢測(cè)陰道毛滴蟲的研究.pdf

1、目的:
　　探討PCR法對(duì)酚氯仿法和煮沸法提取的陰道毛滴蟲DNA的檢測(cè)率，比較LAMP和PCR法對(duì)陰道毛滴蟲檢出率的差異。
　　方法:
　　收集臨床婦科門診陰道毛滴蟲濕片直接鏡檢法為陽性的陰道分泌物標(biāo)本72例，健康體檢的女性的陰道分泌物標(biāo)本30例，平均分成兩份，分別用酚氯仿法和煮沸法提取DNA，根據(jù)NCBI基因庫中陰道毛滴蟲標(biāo)準(zhǔn)株的基因序列，合成3對(duì)特異性引物。將提取的DNA標(biāo)本用這3對(duì)引物分別進(jìn)行PCR反應(yīng)，比較這兩

2、種方法提取DNA對(duì)陰道毛滴蟲檢出率的差異。針對(duì)陰道毛滴蟲基因中高度重復(fù)的2000 bp的DNA片段，合成6對(duì)引物，用LAMP法檢測(cè)陰道毛滴蟲，并比較LAMP法和PCR法對(duì)陰道毛滴蟲檢出率的差異。
　　結(jié)果:
　　陰道毛滴蟲通過酚氯仿法和煮沸法提取DNA，用核酸蛋白分析儀測(cè)其濃度及吸光度A260和A280的比值，均在實(shí)驗(yàn)正確范圍內(nèi)。以兩種方法提取的DNA為模板，均擴(kuò)增出了3條特異性片段，其大小分別為300 bp，120 bp和

3、312bp。酚氯仿法法與煮沸法提取的DNA對(duì)陰道毛滴蟲的檢出率無顯著性差異(P＞0.05)。LAMP法對(duì)陽性陰道毛滴蟲進(jìn)行體外擴(kuò)增，用瓊脂糖凝膠電泳可出現(xiàn)階梯狀條帶，加入熒光染料SYBR Green后，可在紫外燈下觀察到熒光。LAMP法對(duì)陰道毛滴蟲的檢出率與PCR法相比有顯著性差異(P＜0.05)，LAMP法檢出率高于PCR法。
　　結(jié)論:
　　PCR法檢測(cè)酚氯仿法和煮沸法提取的陰道毛滴蟲DNA之間無顯著性差異。LAMP法對(duì)