維生素E抗紫外線誘導的北京油雞成纖維細胞凋亡作用的研究.pdf

1、本文以北京油雞胚胎為材料，采用組織塊貼壁培養(yǎng)法進行細胞培養(yǎng)，系統(tǒng)闡述了在紫外線照射誘導的北京油雞成纖維細胞的凋亡過程中維生素E對細胞凋亡的影響。應用MTT法進行細胞增殖檢測，AnnexinV-EGFP/PI檢測磷脂酰絲氨酸結合力的強弱，Rh-123檢測線粒體膜電位的變化，F(xiàn)CM檢測細胞周期的變化，RT-PCR檢測紫外線及維生素E作用前后bcl-2、bax、fas、caspase-3基因mRNA表達水平的變化。本實驗結果如下： 1

2、.紫外線對成纖維細胞有明顯的促凋亡作用，而且具有作用時間依賴性，照射時間越長，凋亡效果越明顯，當照射達32min后，細胞生長基本受到全面抑制。維生素E能明顯抑制細胞的凋亡，濃度越大抑制效果越明顯。但是，當達到50μmol/L后，用藥組的細胞活性反而低于非用藥組，表明維生素E對細胞凋亡的抑制也是在一定限度內發(fā)揮作用，超過限度，細胞生長受到抑制。 2.本實驗通過流式細胞儀定量檢測，表明維生素E有較強的抑制凋亡作用。維生素E作用經(jīng)紫外

3、線照射的細胞后，通過AnnexinV-EGFP標記結合流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)細胞凋亡比例有所降低，并且，隨著細胞培養(yǎng)時間的延長，維生素E抑制細胞凋亡的效果增強。 3.本實驗采用Rh-123標記結合流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)，維生素E作用于紫外線照射誘導的凋亡細胞后，線粒體膜電位升高。但是，隨著培養(yǎng)時間的延長，線粒體膜電位逐漸降低。由此可以推測，線粒體參與了維生素E抑制細胞凋亡的過程。 4.本實驗通過檢測維生素E作用于紫外線照射誘導的

4、凋亡細胞的細胞周期，發(fā)現(xiàn)經(jīng)紫外線照射的細胞發(fā)生S期阻滯，導致G2/M期細胞的減少。而維生素E的作用可以逆轉紫外線照射誘導的S期阻滯，引起G2/M期細胞的增加。細胞在G2/M期比率的提高，允許細胞在有絲分裂以前有更多的時間進行修復。維生素E處理的結果使細胞在G2/M期增加，所以維生素E可能通過調控細胞周期的分配進而發(fā)揮抗凋亡的作用。 5.RT-PCR結果顯示紫外線作用后，bcl-2基因較對照組無明顯變化，bax、fas、caspa