CD34陽性造血細胞的微小殘留病和形貌研究.pdf

1、第一部分:CD34陽性造血細胞的微小殘留病檢測目的:通過免疫磁珠法純化CD34+細胞,探討用熒光原位雜交技術檢測其中微小殘留病的敏感性.材料與方法:10例發(fā)病時白血病細胞高表達CD34抗原的白血病患者在緩解狀態(tài)時取其骨髓細胞,利用MiniMACS提純CD34+細胞,流式細胞儀檢測提純前后標本中CD34+細胞比例.將純化前標本和CD34+細胞分別用FISH技術進行微小殘留病檢測,結果用組間自身配對t檢驗方法進行統(tǒng)計分析.第二部分:CD34

2、陽性造血細胞形貌研究目的:應用光學及原子力顯微鏡研究健康人、初發(fā)急性髓細胞白血病(M2b)患者的骨髓及健康人、治療后持續(xù)緩解期白血病患者、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者外周血的CD34+細胞形貌特征,比較相互間差異.材料與方法:應用MACS純化CD34+細胞,流式細胞儀檢測純化前后樣本的CD34+細胞比例.將健康人骨髓及外周血CD34+細胞和初發(fā)急性髓細胞白血病(M2b)骨髓CD34+細胞分別制作成涂片,應用瑞氏-吉姆薩染液進行染色,在光

3、學顯微鏡下觀察.將健康人和初發(fā)急性髓細胞白血病(M2b)骨髓各1例的CD34+細胞制成樹脂包埋塊,利用超薄切片機切成厚度為60nm的薄片,分別用原子力顯微鏡觀測細胞內部結構.原子力顯微鏡觀測細胞表面形貌時,各組每例患者隨機觀測20個細胞,每個細胞不同部位做2μ m×2μ m圖像5幅.將5幅圖像的平均粗糙度、均方根粗糙度、表面顆粒平均高度的平均值作為該細胞的參數.各組的參數利用單因素組間方差分析方法進行比較.結論:免疫磁珠技術可純化單個核

4、細胞中的CD34+細胞,其純度達到形態(tài)學研究的需要.光學顯微鏡不能辨別健康人骨髓、外周血來源的CD34+細胞,但可將這兩種CD34+細胞與初發(fā)急性髓細胞白血病患者(M2b)骨髓來源的CD34+細胞相區(qū)別.原子力顯微鏡可觀測細胞的內部結構,初步結果未發(fā)現健康人CD34+細胞與CD34+白血病細胞內部結構存在差異.原子力顯微鏡可觀測細胞表面形貌,初發(fā)急性髓細胞白血病(M2b)組在均方根粗糙度、平均粗糙度、表面顆粒平均高度方面明顯高于其它來源