反義核苷酸抑制GA表達對胃癌增殖能力影響的實驗研究.pdf

1、目的:通過把轉(zhuǎn)染了含谷氨酰胺酶基因C末端反義序列質(zhì)粒的胃癌細胞接種于裸鼠,觀察其成瘤能力及增殖能力的變化,檢驗反義核酸技術(shù)抑制谷氨酰胺酶表達對腫瘤生長的抑制作用,為腫瘤的基因治療提供新的理論依據(jù).方法:該課題前期階段已將含谷氨酰胺酶基因C末端反義序列的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入胃癌細胞并命名為SGC-7901<'GA>.先把SGC-7901<'GA>細胞和空白對照組細胞SGC-7901<'Neo>進行體外培養(yǎng),再把兩種胃癌細胞接種于6周齡BALB/C裸

2、鼠皮下,建立胃癌的裸鼠動物模型,觀察裸鼠成瘤情況.采用MTT法檢測兩種胃癌細胞在體外生長能力的差異,免疫組織化學(xué)方法(S-P法)檢測腫瘤組織增殖細胞核抗原(PCNA)表達,TUNEL法檢測腫瘤組織細胞凋亡,采用RT-PCR技術(shù)檢測腫瘤組織中谷氨酰胺酶mRNA的含量.結(jié)果:1.兩組細胞的生長曲線顯示SGC-7901<'GA>細胞增生速度明顯低于對照組.2.以相同的細胞濃度接種于裸鼠,實驗組成瘤時間明顯晚于對照組,成瘤后腫瘤生長速度實驗組也

3、明顯慢于對照組,實驗組腫瘤平均重量明顯低于對照組.3.實驗組腫瘤組織的細胞增殖指數(shù)明顯低于對照組,而細胞凋亡指數(shù)明顯高于對照組.4.腫瘤組織中谷氨酰胺酶mRNA的含量實驗組明顯低于對照組.結(jié)論:通過谷氨酰胺酶基因C末端反義序列封閉谷氨酰胺酶的基因,抑制了谷氨酰胺酶的表達,降低了胃癌細胞內(nèi)谷氨酰胺酶的活性,阻斷了胃癌對谷氨酰胺的利用,從而抑制了腫瘤的增殖,促進了腫瘤細胞的凋亡.反義核苷酸技術(shù)抑制谷氨酰胺酶表達的方法是治療腫瘤的一個新途徑.