水稻RACK1基因（OsRACK1）在干旱脅迫響應中的功能研究.pdf

1、干旱是影響植物生長發(fā)育的重要逆境因子，造成農作物減產，并使生態(tài)環(huán)境日益惡化。因此，探討植物的抗旱機理已經成為現代植物學和農學研究工作中急需解決的關鍵問題之一。已有研究表明，擬南芥中rack1突變體具有很強的耐旱性。通過序列比對，在水稻基因組中找到2個與編碼擬南芥RACK1高度同源的基因，本研究通過構建RACK1基因過量表達和反義抑制表達的轉基因水稻，研究了水稻RACK1基因在干旱脅迫中的作用。取得的主要研究結果是： 1、將帶有目

2、的基因的過表達和反義表達載體通過凍融法轉入農桿菌，再根據農桿菌介導的遺傳轉化法將目的基因轉入水稻愈傷中，通過潮霉素篩選得到抗性愈傷組織，經分化再生獲得了T0代轉基因植株。將得到的轉基因植株進行鑒定，先通過GUS染色進行初步的檢測，然后對陽性植株進行基因組DNA的PCR法進行鑒定，再通過Southern blot對目的基因及目的基因的拷貝數進行檢測，最后通過RQ-PCR對目的基因的表達量進行鑒定，獲得了RACK1基因過量表達和反義抑制表達

3、的轉基因水稻和T1代種子。 2、對得到的T1代種子進行種子萌發(fā)試驗，并檢測種子在萌發(fā)過程中可溶性糖、可溶性蛋白和內源ABA的含量。結果表明，過表達種子萌發(fā)比對照種子快，而對照種子萌發(fā)快于反義種子萌發(fā)；過表達萌發(fā)種子可溶性糖的含量也較高，而可溶性蛋白含量和ABA含量低。 3、對T1代幼苗在5％和10％PEG6000模擬干旱情況下進行相關生理分析結果表明，過表達植株葉的相對含水量、葉綠素含量、脯氨酸含量、抗氧化酶的活性和AB

4、A含量均低于對照，后者又低于反義表達植株，而MDA含量和電導率則相反。 4、Real time PCR分析結果表明，干旱處理和ABA處理下不同基因型見DREB1表達無顯著差異，但反義表達水稻的P5CS的表達顯著高于非轉基因水稻，后者又顯著高于RACK1過表達水稻。 根據以上結果并結合前人的研究，認為RACK1在水稻中的作用與在擬南芥中相似，均在植物干旱脅迫下起作用，RACK1表達受抑制的水稻植株較野生型更加耐旱，表明RA