TIMP-1在哮喘大鼠氣道重塑中的作用及抗RANTES抗體的干預影響.pdf

1、背景：支氣管哮喘（簡稱哮喘）是一種呼吸系統常見的慢性疾病，是以氣道高反應性、氣道慢性炎癥及氣道重塑為特征的變態(tài)反應性疾病。隨著社會的發(fā)展，其發(fā)病率不斷上升，特別是兒童哮喘更加明顯，給社會及家庭帶來長期的負擔和壓力。因此，哮喘的發(fā)病機制和治療一直是研究的熱點，人們對哮喘的認識已經開始在分子-基因水平上探究病因、發(fā)病機制及相應的診斷和治療方法。但是，哮喘的發(fā)生是多因素、多基因、多環(huán)節(jié)相互作用的結果，許多問題有待解決，進一步研究哮喘的發(fā)病機制

2、及尋求新的治療方法成為當前醫(yī)學界普遍關注和迫切解決的問題。
　　 目的：以哮喘大鼠氣道模型為基礎，通過研究金屬蛋白酶組織抑制劑-1(TIMP-1)在氣道重塑中的表達情況，并用計算機圖像分析軟件對氣道重塑程度情況進行量化，進而探討哮喘大鼠模型中TIMP-1與氣道重塑的關系；同時應用抗正常T細胞表達和分泌的活性調節(jié)蛋白抗體（抗RANTES抗體）對哮喘大鼠進行干預，通過肺組織中TIMP-1表達的變化以及量化的氣道重塑情況改變，來探討抗

3、RANTES抗體對氣道重塑的影響，從而為哮喘的臨床治療提供動物實驗依據。
　　 方法：將36只健康雄性wistar大鼠隨機分為三組：哮喘模型組、抗RANTES抗體干預組、正常對照組，每組12只。哮喘模型組和抗RANTES抗體干預組于第1、7、14天腹腔注射10％抗原液1ml(含卵白蛋白100mg、氫氧化鋁100mg)進行致敏，正常對照組腹腔注射等量生理鹽水致敏。從第21天起將哮喘模型組、抗RANTES抗體干預組大鼠分別置于密閉玻

4、璃罩內，霧化吸入1％的卵白蛋白激發(fā)，每次霧化吸入30分鐘，隔天1次，共6周，正常對照組用等量的生理鹽水進行激發(fā)?？筊ANTES抗體干預組自霧化激發(fā)后1周起即從第28天起每次激發(fā)前半小時給予尾靜脈注射抗RANTES抗體1ug，哮喘模型組和正常對照組給予尾靜脈注射等量生理鹽水，隔天1次，共5周。觀察三組實驗大鼠的一般狀況，包括活動、呼吸、神態(tài)、毛發(fā)等。末次激發(fā)結束后24小時用1％戊巴比妥那0.2ml/只腹腔注射麻醉各組大鼠，打開胸腔，取出左

5、肺組織。作HE染色病理圖片，光鏡觀察三組實驗大鼠的支氣管肺組織的病理改變、用計算機圖像分析軟件分別測定三組實驗大鼠支氣管基底膜周長(Pbm)、氣道平滑肌面積(WAm)、氣道內壁面積(WAi)，并用Pbm標準化，分別以WAm/Pbm及WAi/Pbm表示氣道平滑肌面積、氣道內壁面積，量化氣道重塑程度的改變；采用免疫組化方法測定三組實驗大鼠肺組織TIMP-1的相對積分光密度的改變，觀察TIMP-1的表達情況。
　　 結果：(1)三組大

6、鼠的一般狀況：①哮喘模型組：霧化吸入卵白蛋白后大部分大鼠出現煩躁不安，搔抓顏面，鼻扇，毛發(fā)失去光澤，打噴嚏，口唇發(fā)紺，繼而大鼠安靜不動，弓背，張口呼吸，呼吸加深加快，前肢縮抬，四肢顫抖，口鼻流出粘液，精神不振和反應遲鈍，停止霧化后上述表現逐漸緩解。②抗RANTES抗體干預組：第1周每次霧化吸入卵白蛋白后，大部分表現與哮喘模型組相似，而在應用抗RANTES抗體后，雖有煩躁、噴嚏、四肢抓撓，但無明顯的呼吸困難、口唇發(fā)紺表現。③正常對照組：致

7、敏及任意一次激發(fā)后均正常飲食、飲水，精神活潑、反應靈敏、呼吸平穩(wěn)、毛色光潔，沒有呼吸急促、煩躁不安或口周發(fā)紺的表現。
　　 (2)三組大鼠氣道平滑肌的比較：哮喘模型組大鼠氣道平滑肌面積WAm/Pbm[(5.78±1.36)μm2/μm]明顯大于正常對照組大鼠的氣道平滑肌面積WAm/Pbm[(3.35±1.01)μm2/μm](P＜0.05)；抗RANTES抗體干預組大鼠氣道平滑肌面積WAm/Pbm[(4.12±1.21)μm2/

8、μm]較哮喘模型組大鼠的氣道平滑肌面積WAm/Pbm顯著降低(P＜0.05)；抗RANTES抗體干預組大鼠的氣道平滑肌面積WAm/Pbm與正常對照組大鼠氣道平滑肌面積WAm/Pbm相比無差別(P＞0.05)。
　　 (3)三組大鼠氣道內壁面積的比較：哮喘模型組大鼠氣道內壁面積WAi/Pbm[(15.10±3.99)μm2/μm]明顯大于正常對照組大鼠的氣道氣道內壁面積WAi/Pbm[(9.25±2.29)μm2/μm](P＜0.

9、05)；抗RANTES抗體干預組大鼠氣道內壁面積WAi/Pbm[(10.01±2.69)μm2/μm]較哮喘模型組大鼠的氣道內壁面積WAi/Pbm顯著降低；抗RANTES抗體干預組大鼠的氣道內壁面積WAm/Pbm與正常對照組大鼠的氣道內壁面積WAi/Pbm相比無差別(P＞0.05)。
　　 (4)三組實驗大鼠肺組織TIMP-1表達的變化：哮喘模型組大鼠肺組織的TIMP-1表達[積分光密度(1.9580±0.0927)]較正常對照

10、組大鼠肺組織的TIMP-1表達[積分光密度(0.7623±0.1000)]增強(P＜0.05)；哮喘模型組大鼠肺組織的TIMP-1表達較抗RANTES抗體干預組大鼠肺組織的TIMP-1表達[積分光密度(0.9770±0.0233)]增強(P＜0.05)；抗RANTES抗體干預組大鼠肺組織的TIMP-1表達與正常對照組大鼠肺組織的TIMP-1表達相比無差別(P＞0.05)。
　　 結論：(1)哮喘大鼠模型成功；(2)哮喘模型組的大