HBV對(duì)人近端腎小管上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的:
　　 通過(guò)將PHY106-HBV質(zhì)粒（含C基因型HBV的全基因組）轉(zhuǎn)染至體外培養(yǎng)的正常人近端腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)，研究乙型肝炎病毒(HBV)在HK-2細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)和對(duì)HK-2細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的作用及其機(jī)制。初步探討乙型肝炎病毒在乙型肝炎病毒相關(guān)性腎炎(HBV-GN)中的作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 將體外培養(yǎng)HK-2細(xì)胞，分為HK-2組、HK-2-PHY106組（轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒PHY106組）、HK-2-P

2、HY106-HBV組（轉(zhuǎn)染PHY106-HBV質(zhì)粒組）和SB203580（轉(zhuǎn)染PHY106-HBV質(zhì)粒前加入P38絲裂原活化蛋白激酶特異性抑制劑預(yù)處理）組。用脂質(zhì)體lipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染HK-2細(xì)胞。用電化學(xué)發(fā)光免疫分析法（ECLIA法）檢測(cè)各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中HBsAg與HBeAg的含量。免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)轉(zhuǎn)染72h后各組E-鈣粘素(E-cadherin)、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)的表達(dá)。半定量RT-PC

3、R法檢測(cè)轉(zhuǎn)染72h后轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-1(TGF-β1)mRNA在各組細(xì)胞的表達(dá)情況。Westernblot印跡檢測(cè)轉(zhuǎn)染72h后各組E-cadherin、α-SMA、磷酸化P38絲裂原活化蛋白激酶(p-P38MAPK)和P38MAPK(P38絲裂原活化蛋白激酶)的蛋白表達(dá)情況及加入P38MAPK特異性抑制劑SB203580后對(duì)E-cadherin和α-SMA蛋白表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果:
　　 HK-2-PHY106-HBV

4、組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中可檢測(cè)到HBsAg和HBeAg的高表達(dá);免疫細(xì)胞化學(xué)染色及Western印跡均顯示HK-2-PHY106-HBV組E-cadherin蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(P＜0.05)，而α-SMA蛋白表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.05)。RT-PCR法顯示HK-2-PHY106-HBV組的TGF-β1mRNA表達(dá)上調(diào)(P＜0.05)。Western印跡顯示HK-2-PHY106-HBV組的p-P38MAPK蛋白表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.05)，加

5、入SB203580后p-P38MAPK蛋白表達(dá)明顯下調(diào)(P＜0.05)，且能阻止HBV引起的E-cadherin蛋白下調(diào)和α-SMA蛋白上調(diào)(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 HBV可在HK-2細(xì)胞內(nèi)高效復(fù)制，表達(dá)乙肝表面抗原和乙肝e抗原，并且能夠?qū)е翲K-2細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，其機(jī)制可能是通過(guò)激活TGF-β1/P38MAPK信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)的，P38MAPK的特異性抑制劑SB203580可有效阻止HBV引起的腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)