秦艽AtNHX1基因轉(zhuǎn)化及O-甲基轉(zhuǎn)移酶基因克隆.pdf_第1頁(yè)
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1、龍膽科龍膽屬植物秦艽是分布于我國(guó)西北地區(qū)的一種傳統(tǒng)中草藥，其主要次生代謝產(chǎn)物龍膽苦苷能夠治療風(fēng)濕、疼痛和潰瘍等癥。正是由于秦艽具有重要的藥用價(jià)值，它的野生種質(zhì)資源已被過(guò)渡開(kāi)采，生境也受到了嚴(yán)重的破壞。 本研究的目的是通過(guò)細(xì)胞工程手段為秦艽的保護(hù)和利用提供借鑒。擬在建立再生體系的基礎(chǔ)上，通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)提高秦艽的抗鹽性狀。利用分子生物學(xué)手段，從秦艽中分離與抗逆相關(guān)的基因。 以秦艽葉片為外植體，通過(guò)組織培養(yǎng)方法探討了秦艽離體再

2、生的條件。 采用高效液相法測(cè)定秦艽愈傷組織以及各階段體細(xì)胞胚中龍膽苦苷的含量，發(fā)現(xiàn)愈傷組織中不能檢測(cè)到龍膽苦苷，球形胚、心形胚、魚(yú)雷胚和子葉狀胚中龍膽苦苷的含量分別為0.2609％、0.3282％、0.0285％和0.8062％(干重)。 通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法將擬南芥液泡膜NaⅦ逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因.AtNHXl導(dǎo)入秦艽。將具有卡那霉素抗性的植株進(jìn)行：PCR、RT-PCR以及實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)。對(duì)非轉(zhuǎn)基因植株和轉(zhuǎn)基因植

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