重組人LFA3-抗體融合蛋白在健康受試者和銀屑病患者體內(nèi)的藥物動力學(xué)和藥效學(xué)初步研究.pdf

1、目的:建立一種注射用重組人LFA3-抗體融合蛋白(rhLFA3IgFP,上?？贵w工程技術(shù)研究中心研制)藥物濃度測定方法,并采用此方法測定血清中該受試藥物濃度,進而初步探索注射用rhLFA3IgFP在健康受試者及慢性尋常型中重度銀屑病患者人體內(nèi)的藥物動力學(xué)和藥效學(xué)規(guī)律。 方法: 第一部分是方法學(xué)研究,摸索血清中注射用rhLFA3IgFP濃度測定方法并加以驗證； 第二部分是一個開放性的劑量遞增單次給藥試驗,24名健康

2、受試者每8人一組,按照醫(yī)生接診時間先后分成三個組,分別接受單次肌肉注射5mg、15mg和25mg劑量的注射用rhLFA3IgFP,并留取不同時間點的血清樣本進行血藥濃度測定； 第三部分為一組開放性的恒定劑量多次給藥試驗,12名慢性尋常型中重度銀屑病患者,每人接受每周1次,每次1.5mg,連續(xù)8周的注射用rhLFA3IgFP肌肉注射試驗性治療,同樣留取血清樣本進行血藥濃度測定,及留取抗凝血檢測淋巴細(xì)胞亞型(CD4+和CD8+)。淋

3、巴細(xì)胞亞型CD4+和CD8+使用流式細(xì)胞儀(FCM)檢測,血清注射用rhLFA3IgFP濃度通過新建的酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測,藥物動力學(xué)參數(shù)采用國內(nèi)常用的3p97應(yīng)用軟件包計算,統(tǒng)計分析使用SPSS 13.0軟件包,具體的統(tǒng)計方法涉及Student's t-test,LSD-test,非參數(shù)秩檢驗(Wilcoxon Test)及方差分析(AVONA),P<0.05定義為有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果:新建的ELISA方法是

4、將抗人CD58單克隆抗體包被于酶標(biāo)板,該抗體可以俘獲待檢樣品中的注射用rhLFA3IgFP,檢測抗體為針對另一表位的辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的抗人CD58單克隆抗體,可與被俘獲的注射用rhLFA3IgFP特異結(jié)合。再加入HRP底物后,顯色反應(yīng)強度與俘獲的注射用rhLFA3IgFP成正相關(guān),因此可用于檢測樣品中注射用rhLFA3IgFP的含量。方法學(xué)確證研究表明本法測定血清注射用rhLFA3IgFP的特異性、靈敏度、測量范圍、精密度和

5、回收率均符合臨床藥物動力學(xué)研究的要求。用該方法測定的血藥濃度經(jīng)軟件分析顯示,單次給藥后藥物濃度一時間曲線符合一房室開放模型,AUC0-1200h(用藥后能檢測出藥物濃度的最長時間點為給藥后1200小時)與劑量呈線性相關(guān),三組間平均峰濃度(Cmax)與劑量的比值基本相等。組與組之間清除率(Cls/F)、消除半衰期(T1/2ke)不存在顯著性差異,T1/2ke約為11天左右,給藥后可以很快觀察到一過性、輕微的T淋巴細(xì)胞亞型CD4+和CD8+

6、百分比的降低。在恒定劑量多次給藥組,8次用藥后藥物濃度-時間曲線符合-房室開放模型,T1/2ke為307.9±32.7h,即約為11～14d。中重度尋常型銀屑病患者血清藥物濃度,平均在第4次給藥后(首次給藥后的第28天)達穩(wěn)態(tài)水平。CD4+和CD8+淋巴細(xì)胞計數(shù)在給藥后迅速下降并在給藥期間保持低水平,停藥后很快恢復(fù)至基線期正常水平。 結(jié)論:本課題研究中新建立的血清藥物濃度測定方法簡單、可靠、有效,符合實驗要求；注射用rhLFA3